应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » Gibson assembly 的一点疑问
51/1返回列表
查看: 3670  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

xixi_pds7

银虫 (小有名气)

[交流] Gibson assembly 的一点疑问 已有3人参与

哪位做过Gibson assembly的，请来解答我的一点疑问，gibson assembly是链接两条线型片段的，那么质粒怎么做成线型，而且在需要的地方断开？gibson说是不用任何内切酶，不需要任何酶切位点，那么怎么做到在需要的位置断开的？看protocol上只是说， generate the segments by PCR，可是怎么得到？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-01-28 07:29:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xixi_pds7

银虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 547star at 2014-01-31 09:41:42
可以不用酶切位点，不用可能更好扩增。如果质粒都扩增出来很多带，可以通过优化或者胶回收来解决。扩增出来的片段两端是重组的overlap区。一般质粒可以用同一对引物，需要考虑overlap的是插入片段的引物。从你的帖 ...

我的问题是前段，因为Gibson Assembly 是两条线性链的链接，我只是有点疑惑，怎么保证自己的质粒在需要的地方断开呢
赞一下 回复此楼
5楼2014-01-31 10:03:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答

547star

木虫 (著名写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖交流！ 2014-01-31 12:56:28
根据质粒序列设计两条引物进行PCR扩增得到线型双链DNA。
赞一下 回复此楼
为什么
2楼2014-01-31 00:57:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xixi_pds7

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 547star at 2014-01-31 00:57:30
根据质粒序列设计两条引物进行PCR扩增得到线型双链DNA。

就是不用酶切点了？可以这样理解么，就是说，PCR的时候会产生很多片段，只有含有overlap同源臂的那一段才可以扩增？
赞一下 回复此楼
3楼2014-01-31 08:36:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

547star

木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by xixi_pds7 at 2014-01-31 08:36:30
就是不用酶切点了？可以这样理解么，就是说，PCR的时候会产生很多片段，只有含有overlap同源臂的那一段才可以扩增？...

可以不用酶切位点，不用可能更好扩增。如果质粒都扩增出来很多带，可以通过优化或者胶回收来解决。扩增出来的片段两端是重组的overlap区。一般质粒可以用同一对引物，需要考虑overlap的是插入片段的引物。从你的帖子的消息看，个人建议你先做虚拟克隆，弄清楚了，再来设计引物进行PCR和Gibson Assembly。
赞一下 回复此楼
为什么
4楼2014-01-31 09:41:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 求材料，环境专业调剂 +3 18567500178 2026-03-18 3/150 2026-03-23 23:50 by 热情沙漠
[考研] 269求调剂 +4 我想读研11 2026-03-23 4/200 2026-03-23 21:25 by pswait
[考研] 一志愿211 初试270分 求调剂 +4 谷雨上岸 2026-03-23 5/250 2026-03-23 21:18 by 不惑可乐
[考研] 08工学调剂 +7 用户573181 2026-03-20 11/550 2026-03-23 15:47 by 我爱学习学习使�
[考研] 求老师收我 +3 zzh16938784 2026-03-23 3/150 2026-03-23 12:56 by ztnimte
[考研] 291求调剂 +5 孅華 2026-03-22 5/250 2026-03-23 09:20 by haoshis
[考研] 289材料与化工（085600）B区求调剂 +3 这么名字咋样 2026-03-22 4/200 2026-03-22 17:56 by 云民大李老师
[考研] 298求调剂一志愿211 +3 上岸6666@ 2026-03-20 3/150 2026-03-22 15:50 by ColorlessPI
[考研] 求调剂院校信息 +6 CX 330 2026-03-21 6/300 2026-03-22 15:25 by 无懈可击111
[考研] 303求调剂 +5 安忆灵 2026-03-22 6/300 2026-03-22 12:46 by 素颜倾城1988
[考研] 材料学硕301分求调剂 +7 Liyouyumairs 2026-03-21 7/350 2026-03-21 22:31 by peike
[考研] 化学调剂 +5 yzysaa 2026-03-21 5/250 2026-03-21 22:12 by peike
[考研] 材料求调剂 +5 @taotao 2026-03-21 5/250 2026-03-21 20:55 by lbsjt
[考研] 材料学学硕080502 337求调剂-一志愿华中科技大学 +4 顺顺顺mr 2026-03-18 5/250 2026-03-21 10:22 by luoyongfeng
[考研] 一志愿中海洋材料工程专硕330分求调剂 +8 小材化本科 2026-03-18 8/400 2026-03-20 23:16 by JourneyLucky
[考研] 一志愿西安交通大学 学硕 354求调剂211或者双一流 +3 我想要读研究生 2026-03-20 3/150 2026-03-20 20:13 by JourneyLucky
[考研] 求调剂 +3 eation27 2026-03-20 3/150 2026-03-20 19:32 by JourneyLucky
[考研] 广西大学家禽遗传育种课题组2026年硕士招生（接收计算机专业调剂） +3 123阿标 2026-03-17 3/150 2026-03-20 15:58 by 飞行琦
[考博] 申博26年 +3 八6八68 2026-03-19 3/150 2026-03-19 19:43 by nxgogo
[考研] 材料工程专硕调剂 +5 204818@lcx 2026-03-17 6/300 2026-03-18 22:55 by 204818@lcx
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭