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分光光度计参比、空白参比的问题。 已有4人参与
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我们分光光度计是那种放两个比色皿，一个一直不动作为参比，另一个用来测水样。 我测TN\TP的时候，都是用纯水较零，然后测空白样、水样、最后结果用水样减去空白样。 现在测叶绿素A，我还是先用纯水较零，然后测90%丙酮（也就是空白样），水样，最后用水样减去空白样。但是别人告诉我不应该这样。应该直接用90%丙酮较零，然后读取各水样就是应得的值。 我现在很疑惑，到底哪种正确，如果是直接用90%丙酮较零，为什么TN\TP不能直接用空白样较零呢？ |
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 实验分析 |
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【答案】应助回帖
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分光光度法水质TN的测定 美析（中国）仪器有限公司 碱性过硫酸钾消解紫外分光光度法GB 11894－89 1 原理 在60℃以上水溶液中，过硫酸钾可分解产生硫酸氢钾和原子态氧，硫酸氢钾在溶液中离解而产生氢离子，故在氢氧化钠的碱性介质中可促使分解过程趋于完全。 分解出的原子态氧在120～124℃条件下，可使水样中含氮化合物的氮元素转化为硝酸盐。并且在此过程中有机物同时被氧化分解。可用紫外分光光度法于波长220和275nm处，分别测出吸光度A220及A275按式(1)求出校正吸光度A： A＝A220－2A275……(1) 按A的值查校准曲线并计算总氮(以NO3-－N计)含量。 2仪器 2.1 美析仪器UV-1100紫外可见分光光度计一台、10mm石英比色皿一对 2.2 民用压力锅、电炉板各1个 2.3 25ml具塞玻璃磨口比色管15个（13用2备） 2.4分析天平及称量纸 2.5 漏斗及中速滤纸 2.6 1000ml容量瓶2个、100ml容量瓶1个 2.7 100ml烧杯4个（3用1备）及玻璃棒 2.8 100ml滴瓶1个、100ml塑料试剂瓶1个 2.9 0.5ml、2ml、5ml、10ml移液管1根、1ml移液管2根、洗耳球（大小各1个） 3 试剂和材料 除非另有说明外，分析时均使用符合国家标准或专业标准的分析纯试剂。 3.1无氨水 蒸馏法：在1000mL蒸馏水中，加入0.10mL硫酸(p=1.84g/mL)。并在全玻璃蒸馏器中重蒸馏，弃去前50mL馏出液，然后将馏出液收集在带有玻璃塞的玻璃瓶中。 3 .2氢氧化钠溶液，200g/L：称取20mL氢氧化钠(NaOH)，溶于水(3.1)中，稀释至100mL。 3.3 氢氧化钠溶液，20g/L：将(3.2)溶液稀释10倍而得。 3.4 碱性过硫酸钾溶液：称取40g过硫酸钾(K2S2O8)，另称取15g氢氧化钠(NaOH)，溶于水(4.1)中，稀释至1000mL，溶液存放在聚乙烯瓶内，最长可贮存一周。 3.5 盐酸溶液，1＋9。 3.6 硝酸钾标准溶液。 3.6.1 硝酸钾标准贮备液，C(KNO3)＝100mg/L：硝酸钾(KNO3)在105～110℃烘箱中干燥3h，在干燥器中冷却后，称取0.7218g，溶于水中，移至1000mL容量瓶中，用水稀释至标线在0～10℃暗处保存，或加入1～2mL三氯甲烷保存，可稳定6个月。 3.6.2 硝酸钾标准使用液，C(KNO3)＝10mg/L：将贮备液用水稀释10倍而得。使用时配制。 3.7 硫酸溶液，1＋35。 4 步骤 4.1 标准曲线的绘制 （1）分别吸取0mL、0.50 mL、1.00 mL、2.00 mL、3.00 mL、5.00 mL mL、7.00 mL、8.00 mL硝酸钾标准使用溶液于25 mL比色管中，用无氨水稀释至10 mL标线。 （2）加入5 mL碱性过硫酸钾溶液，塞紧磨口塞，用纱布及纱绳裹紧管塞，以防止溅出。 （3）将比色管至于压力蒸汽消毒器中，使比色管在过热水蒸气中加热0.5h。 （4）自然冷却，开阀放气，移去外盖，取出比色管并冷至室温。 （5）加入（1+9）盐酸1ml，用蒸馏水稀释至25ml标线。 （6）.在紫外分光光度计上，以零号管溶液作参比，用10mm 石英比色皿分别在220nm及275nm波长处测定吸光度。 （7）用校正的吸光度绘制标准曲线。 4.2 样品测定步骤 取10mL水样，或去适量水样（使氮含量为20-80ug），按校准曲线绘制步骤(2)-（6）操作。按校正曲线，在校准曲线上查出相应的总氮量。 5 计算 总氮（mg/L）=m/v 式中，m为从校准曲线上查的量，ug V为所取水样体积，mL。 |
7楼2014-07-17 18:31:35
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应该是这样的，你用纯水做参比就用纯水校零，用空白样做参比就用空白样校零，试验步骤是你把参比样放进去以后再按校零按键，这样出来的数据就是你的水样的数据，按你的操作做的话试验误差还是蛮大的，因为分光光度数据本来就很精确，每次测量都要校零，我一直在用分光光度法做标准曲线，发现用纯水做参比做出来的方程测水样也用纯水做参比得出的结果和用空白样做出来的方程测水样的时候也是用空白样得出来的结果差别不大，所以你只要测量的时候统一就行了，个人觉得空白样太麻烦。 还要提醒你的就是用分光光度做实验就算同一个水样也测不出同样的值来，还是多次测量求平均值得好。希望能帮到你。 |
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3楼2014-01-23 15:00:43
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