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浅笑包包

新虫 (小有名气)

[求助] 连接 转化 已有9人参与

最近在做连接转化实验,提取带抗性的板子上长出的质粒,与空载体一起电泳,发现比空载体还小,这是为什么,就算是假阳性没有连接上也应该是和空载体一样大呀,求解,难道是感受态污染了吗???都是在带抗性的板子上挑菌的。。。
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

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gyesang: 金币+1, 鼓励交流! 2014-01-18 16:14:35
因为质粒可能螺旋了,跑的快。   最好提质粒酶切鉴定,不一定没有阳性的。
5楼2014-01-18 11:29:32
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liyisdau

新虫 (初入文坛)

质粒不切开是超螺旋的,必须切开跑
7楼2014-01-20 12:16:43
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艰苦温度

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2014-01-18 02:15:19
把质粒切成线性后再比较大小。
提质粒前可以做个菌落PCR初步鉴定。

菌落PCR的作用是什么?
9楼2014-01-23 10:14:35
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普通回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖


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gyesang: 金币+1, 鼓励交流! 2014-01-18 16:14:12
把质粒切成线性后再比较大小。
提质粒前可以做个菌落PCR初步鉴定。
2楼2014-01-18 02:15:19
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yb19841014

铁杆木虫 (著名写手)

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gyesang: 金币+1, 鼓励交流! 2014-01-18 16:14:20
我以前做过一个忘记什么抗性的质粒了   板子上长的 就是有大有小的   好像是这种质粒本身不稳定
3楼2014-01-18 09:30:28
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lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)

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gyesang: 金币+1, 鼓励交流! 2014-01-18 16:14:28
先做个菌落PCR确定阳性菌后,再提质粒跑跑看。
hehe
4楼2014-01-18 11:02:03
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随风飘摇11

木虫 (著名写手)

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gyesang: 金币+1, 鼓励交流! 2014-01-18 16:14:43
提质粒,然后双酶切验证,和质粒PCR同时验证一下

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天道酬勤
6楼2014-01-18 12:44:11
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

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检查酶切位点,会不会有多个酶切位点
8楼2014-01-22 10:26:49
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三蛰

铜虫 (小有名气)

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gyesang: 金币+1, 鼓励交流! 2014-01-25 03:48:08
菌落pcr,看看你构建的质粒载体上有没有你想连接上的目的片段。如果有,提取出来,然后单酶切看看大小,等等,有不少方法来验证。
我不会!
10楼2014-01-23 14:29:39
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