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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 连接 转化
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baihaer

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

1、一般带抗性的板子在短时间内不会出现“杂菌”，而且杂菌与正常菌落有很大差异
2、一般连接转化后，在你小提质粒之前或之后应当将菌落或质粒拿到公司测序，确定质粒是否真实有效
3、电泳实验一般针对蛋白，你可以将空载和质粒分别转染进细胞然后提取蛋白做western，而不是直接用电泳跑质粒
4、其他贴中说质粒超螺旋结构什么的本人不能肯定，因为在本人粗浅的知识里貌似这种质粒应该是独立于DNA而能自主复制的闭合环状DNA分子，不过是空载还是目的片段质粒都是圆环状的，拿这个跑电泳个人觉得没啥意义。
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没有SB的事，只有SB的人
11楼2014-01-23 20:23:13
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a13515517892

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2014-01-25 03:49:05
电泳不能说明什么问题，你需要酶切，或者测序才能证明
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12楼2014-01-23 21:56:43
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Lau_Kimura

铁虫 (正式写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 艰苦温度 at 2014-01-23 10:14:35
菌落PCR的作用是什么？...

粗提质粒PCR效果更稳定：摇菌，取20微升菌液沉淀，50微升双蒸水重悬浮，95度温育7分钟后，取2微升上清做PCR模版即可。
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13楼2014-01-25 01:23:09
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 艰苦温度 at 2014-01-23 10:14:35
菌落PCR的作用是什么？...

做初步筛选，检测转化子是否连入了目的片段。
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14楼2014-01-26 09:50:47
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