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baihaer

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

1、一般带抗性的板子在短时间内不会出现“杂菌”,而且杂菌与正常菌落有很大差异
2、一般连接转化后,在你小提质粒之前或之后应当将菌落或质粒拿到公司测序,确定质粒是否真实有效
3、电泳实验一般针对蛋白,你可以将空载和质粒分别转染进细胞然后提取蛋白做western,而不是直接用电泳跑质粒
4、其他贴中说质粒超螺旋结构什么的本人不能肯定,因为在本人粗浅的知识里貌似这种质粒应该是独立于DNA而能自主复制的闭合环状DNA分子,不过是空载还是目的片段质粒都是圆环状的,拿这个跑电泳个人觉得没啥意义。
没有SB的事,只有SB的人
11楼2014-01-23 20:23:13
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a13515517892

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2014-01-25 03:49:05
电泳不能说明什么问题,你需要酶切,或者测序才能证明
12楼2014-01-23 21:56:43
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Lau_Kimura

铁虫 (正式写手)

引用回帖:
9楼: Originally posted by 艰苦温度 at 2014-01-23 10:14:35
菌落PCR的作用是什么?...

粗提质粒PCR效果更稳定:摇菌,取20微升菌液沉淀,50微升双蒸水重悬浮,95度温育7分钟后,取2微升上清做PCR模版即可。
13楼2014-01-25 01:23:09
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

引用回帖:
9楼: Originally posted by 艰苦温度 at 2014-01-23 10:14:35
菌落PCR的作用是什么?...

做初步筛选,检测转化子是否连入了目的片段。
14楼2014-01-26 09:50:47
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