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浅笑包包

新虫 (小有名气)

[求助] 连接 转化 已有9人参与

最近在做连接转化实验,提取带抗性的板子上长出的质粒,与空载体一起电泳,发现比空载体还小,这是为什么,就算是假阳性没有连接上也应该是和空载体一样大呀,求解,难道是感受态污染了吗???都是在带抗性的板子上挑菌的。。。
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baihaer

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

1、一般带抗性的板子在短时间内不会出现“杂菌”,而且杂菌与正常菌落有很大差异
2、一般连接转化后,在你小提质粒之前或之后应当将菌落或质粒拿到公司测序,确定质粒是否真实有效
3、电泳实验一般针对蛋白,你可以将空载和质粒分别转染进细胞然后提取蛋白做western,而不是直接用电泳跑质粒
4、其他贴中说质粒超螺旋结构什么的本人不能肯定,因为在本人粗浅的知识里貌似这种质粒应该是独立于DNA而能自主复制的闭合环状DNA分子,不过是空载还是目的片段质粒都是圆环状的,拿这个跑电泳个人觉得没啥意义。
没有SB的事,只有SB的人
11楼2014-01-23 20:23:13
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励交流! 2014-01-18 16:14:12
把质粒切成线性后再比较大小。
提质粒前可以做个菌落PCR初步鉴定。
2楼2014-01-18 02:15:19
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yb19841014

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励交流! 2014-01-18 16:14:20
我以前做过一个忘记什么抗性的质粒了   板子上长的 就是有大有小的   好像是这种质粒本身不稳定
3楼2014-01-18 09:30:28
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lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励交流! 2014-01-18 16:14:28
先做个菌落PCR确定阳性菌后,再提质粒跑跑看。
hehe
4楼2014-01-18 11:02:03
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