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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 连接 转化
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浅笑包包

新虫 (小有名气)

[求助] 连接 转化 已有9人参与

最近在做连接转化实验，提取带抗性的板子上长出的质粒，与空载体一起电泳，发现比空载体还小，这是为什么，就算是假阳性没有连接上也应该是和空载体一样大呀，求解，难道是感受态污染了吗？？？都是在带抗性的板子上挑菌的。。。
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Be the change you want to see in the world.
1楼 2014-01-17 17:04:36
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励交流！ 2014-01-18 16:14:35
因为质粒可能螺旋了，跑的快。   最好提质粒酶切鉴定，不一定没有阳性的。
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5楼2014-01-18 11:29:32
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liyisdau

新虫 (初入文坛)
质粒不切开是超螺旋的，必须切开跑
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7楼2014-01-20 12:16:43
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艰苦温度

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2014-01-18 02:15:19
把质粒切成线性后再比较大小。
提质粒前可以做个菌落PCR初步鉴定。

菌落PCR的作用是什么？
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9楼2014-01-23 10:14:35
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普通回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励交流！ 2014-01-18 16:14:12
把质粒切成线性后再比较大小。
提质粒前可以做个菌落PCR初步鉴定。
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2楼2014-01-18 02:15:19
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yb19841014

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励交流！ 2014-01-18 16:14:20
我以前做过一个忘记什么抗性的质粒了   板子上长的 就是有大有小的   好像是这种质粒本身不稳定
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3楼2014-01-18 09:30:28
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lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励交流！ 2014-01-18 16:14:28
先做个菌落PCR确定阳性菌后，再提质粒跑跑看。
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hehe
4楼2014-01-18 11:02:03
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随风飘摇11

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励交流！ 2014-01-18 16:14:43
提质粒，然后双酶切验证，和质粒PCR同时验证一下

[ 发自小木虫客户端 ]
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天道酬勤
6楼2014-01-18 12:44:11
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

检查酶切位点，会不会有多个酶切位点
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8楼2014-01-22 10:26:49
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三蛰

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
gyesang: 金币+1, 鼓励交流！ 2014-01-25 03:48:08
菌落pcr，看看你构建的质粒载体上有没有你想连接上的目的片段。如果有，提取出来，然后单酶切看看大小，等等，有不少方法来验证。
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我不会！
10楼2014-01-23 14:29:39
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