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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR后跑胶没有任何条带
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额敏的雪

金虫 (著名写手)
引用回帖:
19楼: Originally posted by 三蛰 at 2014-01-17 16:42:50
我觉得和taq酶以及ddH2o都有不小的关系。注意作对照，这样能找到问题的源头。

其他

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21楼2014-01-17 18:52:47
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半生一梦

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2014-01-19 19:29:45
个人感觉有可能是产物的量太少了 看不出来啊 建议跑个qPCR看看有没有峰
因为之前自己P个基因就是这样 设计了好多引物都没有条带 后来换了个虫株（做的是线虫）居然就p出来了
定量以后才发现这个基因在不同虫株里面表达量是有差异的 当时白白浪费了2个月啊2个月！
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额敏的雪
22楼2014-01-18 17:24:18
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额敏的雪

金虫 (著名写手)
送红花一朵
引用回帖:
22楼: Originally posted by 半生一梦 at 2014-01-18 17:24:18
个人感觉有可能是产物的量太少了 看不出来啊 建议跑个qPCR看看有没有峰
因为之前自己P个基因就是这样 设计了好多引物都没有条带 后来换了个虫株（做的是线虫）居然就p出来了
定量以后才发现这个基因在不同虫株里面 ...

有可能，谢谢提醒。
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23楼2014-01-18 19:52:21
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半生一梦

木虫 (小有名气)
引用回帖:
23楼: Originally posted by 额敏的雪 at 2014-01-18 19:52:21
有可能，谢谢提醒。...

祝顺利！
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24楼2014-01-19 12:36:40
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adware
顶一下，感谢分享
25楼2014-01-19 13:39:27
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hhhtpj

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2014-01-19 19:29:53
我认为的可能有以下几个方面，供参考吧，首先是材料的问题，可能你要检测的基因没有表达，没有条带，还有就是可能是实验条件的问题，我个人就出现过，用我们实验室的引物和条件，我就做不出来条带，我都怀疑了，突然有一天就没问题了，以后再也没出现过问题，和本实验室的相关老师讨论一下，分析原因，希望对你有帮助。

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额敏的雪
好的！
26楼2014-01-19 15:17:33
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额敏的雪

金虫 (著名写手)
送红花一朵
引用回帖:
26楼: Originally posted by hhhtpj at 2014-01-19 15:17:33
我认为的可能有以下几个方面，供参考吧，首先是材料的问题，可能你要检测的基因没有表达，没有条带，还有就是可能是实验条件的问题，我个人就出现过，用我们实验室的引物和条件，我就做不出来条带，我都怀疑了，突然 ...

谢谢

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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27楼2014-01-19 15:58:57
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luochao2111

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
gyesang: 金币+3, 鼓励交流！ 2014-01-28 22:46:01
我已经硕博五年级了，PCR做的非常多了。给你几点建议：
首先，确认一下你的引物是否有效，如果设计的引物不跨内含子的话，可以直接以基因组DNA做模板PCR一下（cDNA是由mRNA反转录的，mRNA的表达有组织特异性，同时还有因不同培养条件处理表达的选择性剪接差异。如果mRNA里都没有你的基因表达，那肯定是p不出来的）
其次，选取你的基因对应高表达的组织来提mRNA，反转录做模板。可以提高克隆成功的效率
最后，请确保PCR的引物、模板、buffer、dNTP、酶都是彻底混匀后添加，且添加顺序最好为ddH2O，buffer，dNTP，引物，模板，酶
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28楼2014-01-25 23:37:55
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luochao2111

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

基因组如果PCR不出来的话，证明你的引物是没用的，需要重新设计。如果你的基因太长，或者有特殊结构，可以降低退火温度，再反应体系里添加甘油的办法来提高PCR效率。如果是因为表达本底很低的话，可以提高PCR循环数，至36-45个循环
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额敏的雪
29楼2014-01-25 23:42:37
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额敏的雪

金虫 (著名写手)
送红花一朵
引用回帖:
29楼: Originally posted by luochao2111 at 2014-01-25 23:42:37
基因组如果PCR不出来的话，证明你的引物是没用的，需要重新设计。如果你的基因太长，或者有特殊结构，可以降低退火温度，再反应体系里添加甘油的办法来提高PCR效率。如果是因为表达本底很低的话，可以提高PCR循环数 ...

谢谢

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30楼2014-01-26 00:28:28
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