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月季花yrg

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励交流！ 2014-01-16 21:29:19
或许模板有问题，换个模板试试，别人的基因能扩出来不一定你的模板没有问题，可能你的片段部分降解
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» 本帖已获得的红花（最新10朵）

额敏的雪
11楼2014-01-16 21:14:49
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额敏的雪

金虫 (著名写手)
送红花一朵
引用回帖:
11楼: Originally posted by 月季花yrg at 2014-01-16 21:14:49
或许模板有问题，换个模板试试，别人的基因能扩出来不一定你的模板没有问题，可能你的片段部分降解

谢谢，回头试试

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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12楼2014-01-16 21:19:28
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891214

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2014-01-19 19:29:04
如果模板没有问题，那就很有可能是引物的问题；另外还要可能是你PCR体系需要改进；退火温度和延生时间也可能需要改进。建议首先换一下引物试试，引物很重要！希望对你有所帮助！
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» 本帖已获得的红花（最新10朵）

额敏的雪
13楼2014-01-16 22:29:12
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额敏的雪

金虫 (著名写手)
送红花一朵
引用回帖:
13楼: Originally posted by 891214 at 2014-01-16 22:29:12
如果模板没有问题，那就很有可能是引物的问题；另外还要可能是你PCR体系需要改进；退火温度和延生时间也可能需要改进。建议首先换一下引物试试，引物很重要！希望对你有所帮助！

谢谢

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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14楼2014-01-16 22:31:50
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honinglee

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你是10不同基因的各一对引物还是同一个基因不同位置的10引物

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额敏的雪
天下事有难易乎？为之，则难者亦易矣；不为，则易者亦难矣。
15楼2014-01-17 00:07:49
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额敏的雪

金虫 (著名写手)
送红花一朵
引用回帖:
15楼: Originally posted by honinglee at 2014-01-17 00:07:49
你是10不同基因的各一对引物还是同一个基因不同位置的10引物

不同基因的十对引物，那这样还能把引物交叉不？

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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16楼2014-01-17 00:41:21
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honinglee

木虫 (正式写手)
★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2014-01-19 19:29:14
引用回帖:
16楼: Originally posted by 额敏的雪 at 2014-01-17 00:41:21
不同基因的十对引物，那这样还能把引物交叉不？
...

如果是十对不同的引物，再交叉就没有意义啦。你想象一下，这样扩增出来的片段是什么呢？
如果一对引物出现扩增不出来的情况还好理解，比如可能是这个基因有复杂结构什么，有的酶优化了buffer，可以促进模板的解链和酶的结合，适合基因组复杂的情况的扩增。
但十对都出现扩增不出片段的话，就不好说了。你尝试用基因组DNA扩增一下试试看；排除酶没有问题的情况下，可以尝试降低退火温度，两步法扩增等方法。
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天下事有难易乎？为之，则难者亦易矣；不为，则易者亦难矣。
17楼2014-01-17 13:54:15
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额敏的雪

金虫 (著名写手)
引用回帖:
17楼: Originally posted by honinglee at 2014-01-17 13:54:15
如果是十对不同的引物，再交叉就没有意义啦。你想象一下，这样扩增出来的片段是什么呢？
如果一对引物出现扩增不出来的情况还好理解，比如可能是这个基因有复杂结构什么，有的酶优化了buffer，可以促进模板的解链 ...

谢谢

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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18楼2014-01-17 14:26:07
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三蛰

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我觉得和taq酶以及ddH2o都有不小的关系。注意作对照，这样能找到问题的源头。
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我不会！
19楼2014-01-17 16:42:50
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额敏的雪

金虫 (著名写手)
引用回帖:
19楼: Originally posted by 三蛰 at 2014-01-17 16:42:50
我觉得和taq酶以及ddH2o都有不小的关系。注意作对照，这样能找到问题的源头。

同样的聚合酶求基因能扩出来哦

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20楼2014-01-17 18:51:43
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