24小时热门版块排行榜    

查看: 10440  |  回复: 49

月季花yrg

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励交流! 2014-01-16 21:29:19
或许模板有问题,换个模板试试,别人的基因能扩出来不一定你的模板没有问题,可能你的片段部分降解

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

11楼2014-01-16 21:14:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

额敏的雪

金虫 (著名写手)

送红花一朵
引用回帖:
11楼: Originally posted by 月季花yrg at 2014-01-16 21:14:49
或许模板有问题,换个模板试试,别人的基因能扩出来不一定你的模板没有问题,可能你的片段部分降解

谢谢,回头试试

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
12楼2014-01-16 21:19:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

891214

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2014-01-19 19:29:04
如果模板没有问题,那就很有可能是引物的问题;另外还要可能是你PCR体系需要改进;退火温度和延生时间也可能需要改进。建议首先换一下引物试试,引物很重要!希望对你有所帮助!

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

13楼2014-01-16 22:29:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

额敏的雪

金虫 (著名写手)

送红花一朵
引用回帖:
13楼: Originally posted by 891214 at 2014-01-16 22:29:12
如果模板没有问题,那就很有可能是引物的问题;另外还要可能是你PCR体系需要改进;退火温度和延生时间也可能需要改进。建议首先换一下引物试试,引物很重要!希望对你有所帮助!

谢谢

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
14楼2014-01-16 22:31:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

honinglee

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你是10不同基因的各一对引物还是同一个基因不同位置的10引物

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

天下事有难易乎?为之,则难者亦易矣;不为,则易者亦难矣。
15楼2014-01-17 00:07:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

额敏的雪

金虫 (著名写手)

送红花一朵
引用回帖:
15楼: Originally posted by honinglee at 2014-01-17 00:07:49
你是10不同基因的各一对引物还是同一个基因不同位置的10引物

不同基因的十对引物,那这样还能把引物交叉不?

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
16楼2014-01-17 00:41:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

honinglee

木虫 (正式写手)

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2014-01-19 19:29:14
引用回帖:
16楼: Originally posted by 额敏的雪 at 2014-01-17 00:41:21
不同基因的十对引物,那这样还能把引物交叉不?
...

如果是十对不同的引物,再交叉就没有意义啦。你想象一下,这样扩增出来的片段是什么呢?
如果一对引物出现扩增不出来的情况还好理解,比如可能是这个基因有复杂结构什么,有的酶优化了buffer,可以促进模板的解链和酶的结合,适合基因组复杂的情况的扩增。
但十对都出现扩增不出片段的话,就不好说了。你尝试用基因组DNA扩增一下试试看;排除酶没有问题的情况下,可以尝试降低退火温度,两步法扩增等方法。
天下事有难易乎?为之,则难者亦易矣;不为,则易者亦难矣。
17楼2014-01-17 13:54:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

额敏的雪

金虫 (著名写手)

引用回帖:
17楼: Originally posted by honinglee at 2014-01-17 13:54:15
如果是十对不同的引物,再交叉就没有意义啦。你想象一下,这样扩增出来的片段是什么呢?
如果一对引物出现扩增不出来的情况还好理解,比如可能是这个基因有复杂结构什么,有的酶优化了buffer,可以促进模板的解链 ...

谢谢

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
18楼2014-01-17 14:26:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三蛰

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我觉得和taq酶以及ddH2o都有不小的关系。注意作对照,这样能找到问题的源头。
我不会!
19楼2014-01-17 16:42:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

额敏的雪

金虫 (著名写手)

引用回帖:
19楼: Originally posted by 三蛰 at 2014-01-17 16:42:50
我觉得和taq酶以及ddH2o都有不小的关系。注意作对照,这样能找到问题的源头。

同样的聚合酶求基因能扩出来哦

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
20楼2014-01-17 18:51:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 额敏的雪 的主题更新
信息提示
请填处理意见