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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR后跑胶没有任何条带
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额敏的雪

金虫 (著名写手)

[求助] PCR后跑胶没有任何条带 已有17人参与

自己设计了10对引物，跑胶没有任何条带，10对引物都没有出条带，可能原因是什么？是不是说明引物设计的不好？
因为，1.同样的cDNA，用别人的引物（同一植物的其他基因引物）就有条带。2.做了温度梯度PCR，每个温度梯度都没有条带，3 用引物直接跑胶，引物有条带，说明引物存在（我担心稀释的时候引物不小心散出来），4 ，请问还能做些什么来找出问题产生的原因
可是设计引物的时候什么二聚体，错配，跨内含子的网上书上找到的哪些能注意的我都注意了，为什么没有条带，请问引物设计还要注意什么？
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1楼 2014-01-16 19:47:58
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luochao2111

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

基因组如果PCR不出来的话，证明你的引物是没用的，需要重新设计。如果你的基因太长，或者有特殊结构，可以降低退火温度，再反应体系里添加甘油的办法来提高PCR效率。如果是因为表达本底很低的话，可以提高PCR循环数，至36-45个循环
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额敏的雪
29楼2014-01-25 23:42:37
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lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励交流！ 2014-01-16 21:28:45
是不是你参考的基因在里面没有表达。再一个看看你的引物在基因的位置不要在内含子上。
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hehe
2楼2014-01-16 20:22:01
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mjt2007

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2014-01-16 21:28:54
1.不一定是引物的问题，换个Taq酶试一试；
2. 如果10对引物退火温度合适，交叉使用试一下。
好运！
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Theworldisnotinyourbooksandmaps,itisoutthere.
3楼2014-01-16 20:26:51
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额敏的雪

金虫 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by mjt2007 at 2014-01-16 20:26:51
1.不一定是引物的问题，换个Taq酶试一试；
2. 如果10对引物退火温度合适，交叉使用试一下。
好运！

交叉？就是把不同基因的引物混一起pcr？

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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4楼2014-01-16 20:31:24
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