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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » 请教HPLC的使用，不是仪器使用，是测药品的一般步骤，摸条件，建立方法等的步骤。
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匿名

金虫 (小有名气)
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实用小知识、小细节 HPLC---化学

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1楼 2014-01-07 20:44:36
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lifucheng

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
majunyu2007: 金币+5, ★★★很有帮助, 非常感谢！大概了解了， 真是麻烦你了 2014-01-08 12:37:35
好吧 那以RS的方法建立为例 当楼主拿到一个样品 首先要知道已知杂质是啥子 如果不知道 那就请先做破坏实验 看看在各种条件下 可能会产生啥子杂质 楼主是做合成的 那肯定知道物质在酸碱光照高温条件下大概会发生啥子降解反应吧 完成上面两步后 进行初步的方法开发 如果有已知杂质 例如杂质A 杂质B 以及您的主药 比如QMS（青霉素） 将上述物质配置成 QMS 0.1mg/ml  杂质A 杂质B 0.001mg/ml （1%）的混合溶液 选用C18长柱 流动相 乙腈-水 （40:60）开始  利用DAD进行检测 其中DAD开全波长扫描 190nm--400nm 看上述物质在DAD的3D模式下哪个波长响应最大 就选择这个波长作为检测波长 此外 根据峰型及分离度调整流动相比例及是否加入缓冲盐 换柱子之类的 此外 楼主拿到一个样品后 也可以根据药典来参考 比如给你一个激素类药物 比如雌二醇 它的结构与药典已知的药物有类似的 比如炔雌醇 你可以根据 炔雌醇的方法来摸索改进雌二醇的方法 方法验证要等方法大概确定后再做 这就要合成的兄弟和制剂的那些家伙给力了
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7楼2014-01-08 11:55:34
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lifucheng

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
这个不是几句话就说的清楚的 一般药品测定都有标准的 USP或者EP 药典也可以参考下 实战的书可以推荐《药物色谱分析》 讲的很棒
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2楼2014-01-07 21:29:18
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匿名

金虫 (小有名气)
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3楼2014-01-08 11:16:33
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bhyxw

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
3楼: Originally posted by majunyu2007 at 2014-01-08 11:16:33
不是说什么标准什么的，这些我也会查， 我就想知道测一个药品的一般方法， 刚开始是要摸索条件---确定最佳波长，分离度，流动相体系，等等，是不是， 紧接着要方法学验证， 精密度，准确度，专一性， 检测限，等等 ...

对楼主提出的问题，回答部分，仅作交流。
1.如何确定最佳波长？可以用液相自带的紫外或单独的紫外分光光度计扫个谱，在不超过流动相的吸收截止波长情况下，选择一个最佳吸收波长。
2.如何确定流动相体系？一般是甲醇，乙腈，四氢呋喃，水等一种或2种的混合，再保证溶解度的前提下，配制不同极性的流动相体系。
3.关于检测限？一般紫外吸光光度值在0.3-0.7之间比较准确可靠，故配制的样品浓度吸光度最好在这个范围，由于检测器的不同，本人一般是保持在1.0左右。
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4楼2014-01-08 11:26:03
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