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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 疏水柱纯化多肽
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yaiqi-87

铜虫 (小有名气)

[求助] 疏水柱纯化多肽 已有3人参与

化学合成的1.7K的17肽（PI=4.54），样品溶于20mM PB, PH8.0，含1MNaCL（样品中只含裸肽），用以下条件洗脱，
柱子为Hitrip Phenyl (high sub) 1mL
A：20mM PB, PH8.0
B：20mM PB, 1M NaCL, PH8.0
100%B,10min; 100%B→100%A,15min。0.8mL/min
上样后1min就出现一穿透峰，梯度洗脱时未见峰出现。
这种情况说明裸肽未挂柱，请问有什么改进方法使裸肽挂柱？谢谢！
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1楼 2014-01-06 11:20:05
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huaqiangliu

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
yaiqi-87: 金币+5, ★有帮助, 尝试过调Buffer PH到5.5，盐提高到2M，结果差不多。 2014-01-08 10:56:55
调整PH值 或者加大B的盐浓度。靠疏水作用，纯化多肽 可以用反向层析树脂或者反向C18，效果应该更好吧
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2楼2014-01-07 15:02:03
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wolfman840

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
yaiqi-87: 金币+5, ★有帮助 2014-01-08 10:58:02
可以尝试将样品离子提供盐换成硫酸铵。用1M的硫酸铵试试
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3楼2014-01-07 16:47:15
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yaiqi-87

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by wolfman840 at 2014-01-07 16:47:15
可以尝试将样品离子提供盐换成硫酸铵。用1M的硫酸铵试试

组里面以前有人做过蛋白的HIC纯化，据他的经验，氯化钠和硫酸铵的作用都差不多的。
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4楼2014-01-08 10:59:14
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qiujm

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
yaiqi-87: 金币+5 2014-01-08 15:14:08
确实1700的小肽没必要用HIC，用C18制备柱就可以，事实上大部分多肽厂家也是这么做的。
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5楼2014-01-08 13:16:20
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qiujm

木虫 (小有名气)
如果你为了发文章或是其他目的可以试试，从原理上来说，你pH太高了，都带负电了，亲水作用就强了而不是疏水作用，在等电点附近试试，只要能溶解
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6楼2014-01-08 13:21:54
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yaiqi-87

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by qiujm at 2014-01-08 13:16:20
确实1700的小肽没必要用HIC，用C18制备柱就可以，事实上大部分多肽厂家也是这么做的。

尝试过调Buffer PH到5.5，盐提高到2M，结果差不多
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7楼2014-01-08 15:14:46
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qiujm

木虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by yaiqi-87 at 2014-01-08 15:14:46
尝试过调Buffer PH到5.5，盐提高到2M，结果差不多...

那就不适合用HIC，选择其他类型的填料好了
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8楼2014-01-08 15:46:51
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