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yaiqi-87

铜虫 (小有名气)

[求助] 疏水柱纯化多肽 已有3人参与

化学合成的1.7K的17肽(PI=4.54),样品溶于20mM PB, PH8.0,含1MNaCL(样品中只含裸肽),用以下条件洗脱,
柱子为Hitrip Phenyl (high sub) 1mL
A:20mM PB, PH8.0
B:20mM PB, 1M NaCL, PH8.0
100%B,10min; 100%B→100%A,15min。0.8mL/min
上样后1min就出现一穿透峰,梯度洗脱时未见峰出现。
这种情况说明裸肽未挂柱,请问有什么改进方法使裸肽挂柱?谢谢!
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huaqiangliu

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
yaiqi-87: 金币+5, 有帮助, 尝试过调Buffer PH到5.5,盐提高到2M,结果差不多。 2014-01-08 10:56:55
调整PH值 或者加大B的盐浓度。靠疏水作用,纯化多肽 可以用反向层析树脂或者反向C18,效果应该更好吧
2楼2014-01-07 15:02:03
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wolfman840

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
yaiqi-87: 金币+5, 有帮助 2014-01-08 10:58:02
可以尝试将样品离子提供盐换成硫酸铵。用1M的硫酸铵试试
3楼2014-01-07 16:47:15
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yaiqi-87

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by wolfman840 at 2014-01-07 16:47:15
可以尝试将样品离子提供盐换成硫酸铵。用1M的硫酸铵试试

组里面以前有人做过蛋白的HIC纯化,据他的经验,氯化钠和硫酸铵的作用都差不多的。
4楼2014-01-08 10:59:14
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qiujm

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
yaiqi-87: 金币+5 2014-01-08 15:14:08
确实1700的小肽没必要用HIC,用C18制备柱就可以,事实上大部分多肽厂家也是这么做的。
5楼2014-01-08 13:16:20
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qiujm

木虫 (小有名气)

如果你为了发文章或是其他目的可以试试,从原理上来说,你pH太高了,都带负电了,亲水作用就强了而不是疏水作用,在等电点附近试试,只要能溶解
6楼2014-01-08 13:21:54
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yaiqi-87

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by qiujm at 2014-01-08 13:16:20
确实1700的小肽没必要用HIC,用C18制备柱就可以,事实上大部分多肽厂家也是这么做的。

尝试过调Buffer PH到5.5,盐提高到2M,结果差不多
7楼2014-01-08 15:14:46
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qiujm

木虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by yaiqi-87 at 2014-01-08 15:14:46
尝试过调Buffer PH到5.5,盐提高到2M,结果差不多...

那就不适合用HIC,选择其他类型的填料好了
8楼2014-01-08 15:46:51
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