应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于双酶切
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
51/1返回列表
查看: 1738  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

张爽00100

金虫 (小有名气)

[求助] 关于双酶切 已有1人参与

最近在做两个双酶切，NcoI和BamH I;BamH I和XhoI ;都是MBI的，双酶切的buffer分别是1*tango和2*tango，和酶一起的都是10*buffer tango，要稀释吗？还有双酶切的体系一般是怎样的，之前师姐实验做的都是50ul：酶各1ul、DNA 10ul、10*buffer 5ul 、ddH2O 33ul。但是做两次都没有做出来，希望各路大侠赐教。
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

课题相关

» 猜你喜欢
1楼 2013-12-10 21:46:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

张爽00100

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by ww贝尼 at 2013-12-11 08:41:41
我做过质粒的双酶切
做验证的话 10ul的体系  酶各0.5  质粒2.5  buffer分别为1ul、2ul  剩下用ddH2O补足10ul
胶回收 50ul的体系就可以，酶各2.5  质粒25   buffer分别为5ul、10ul 剩下 用ddH2O补足50ul

还有一个问题想请教下，酶切PCR产物时也是这样的体系吗?我之前按照我们实验室的体系做了几次连接，对照组也长菌，好郁闷啊
赞一下 回复此楼
4楼2013-12-11 08:54:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答

ww贝尼

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2013-12-11 09:59:12
我做过质粒的双酶切
做验证的话 10ul的体系  酶各0.5  质粒2.5  buffer分别为1ul、2ul  剩下用ddH2O补足10ul
胶回收 50ul的体系就可以，酶各2.5  质粒25   buffer分别为5ul、10ul 剩下 用ddH2O补足50ul
赞一下 回复此楼
2楼2013-12-11 08:41:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zct2008

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+4, 鼓励交流 2013-12-11 09:59:17
首先你的反应体系应该是对的，没有什么问题。建议你看一下这两个双酶切：NcoI和BamH I;BamH I和XhoI，每一种酶各自的buffer是什么，双酶切时是否通用。例如BamH I和XhoI 这两个酶Takara公司的分别是buffer K和buffer H，双酶切时Takara公司建议使用1*buffer K。由于我没有用过MBI的限制性内切酶，不清楚MBI公司针对这几种酶的buffer是什么，但是原理应该是一样的。所以建议你检查一下所以的buffer是否合适。
另外，酶切时可以在50ul 反应体系中加1ul的BSA，保护酶， 有利于酶切反应。同时在酶切时建议每隔10min轻轻混匀一下，保证酶切充分。
如果实在不行就只好分开做单酶切了。
希望对你有帮助。
赞一下 回复此楼
天行健，君子以自强不息；地势坤，君子以厚德载物。
3楼2013-12-11 08:50:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zct2008

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

另外，酶切时在50ul 反应体系中酶的量适当多加一点，每一种酶可以加2ul, 1ul感觉有点少。
赞一下 回复此楼
天行健，君子以自强不息；地势坤，君子以厚德载物。
5楼2013-12-11 08:56:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料调剂 +4 懒羊羊轻置玉臀 2026-04-02 4/200 2026-04-02 13:23 by Wang200018
[考研] 0710生物学求调剂 +9 manman511 2026-04-01 9/450 2026-04-02 10:00 by zxl830724
[考研] 【求调剂】新能源材料本科，一志愿211，初试321 +6 求调剂学校， 2026-04-02 6/300 2026-04-02 09:41 by 晴空210210
[考研] 266求调剂 +10 阳阳哇塞 2026-04-01 10/500 2026-04-02 09:07 by vgtyfty
[考研] 301求调剂 +13 A_JiXing 2026-04-01 13/650 2026-04-02 09:01 by sanrepian
[考研] 318求调剂，计算材料方向 +7 吸喵有害笙命 2026-04-01 8/400 2026-04-01 23:54 by 义文wang
[考博] 26年申博 +3 staryer 2026-03-30 4/200 2026-04-01 23:21 by ai4pharm
[考研] 材料调剂 +11 一样YWY 2026-03-31 11/550 2026-04-01 22:25 by zhouyuwinner
[考研] 298求调剂 +4 什么是胖头鱼 2026-03-30 6/300 2026-04-01 22:06 by 客尔美德
[考研] 285求调剂 +5 FZAC123 2026-03-30 5/250 2026-04-01 15:50 by 韩雨涵
[论文投稿] chinese chemical letters英文版投稿求助 120+4 Yishengeryi 2026-03-30 5/250 2026-04-01 14:11 by 陆小果画大饼
[考研] 070300化学专业279调剂 +10 哈哈哈^_^ 2026-03-31 10/500 2026-03-31 23:13 by liu823948201
[考研] 318求调剂 +3 笃行致远. 2026-03-31 3/150 2026-03-31 20:27 by 求调剂zz
[考研] 299求调剂 +8 嗯嗯嗯嗯2 2026-03-27 8/400 2026-03-31 18:23 by lizhi8172
[考研] 080500-315分复试调剂 +9 上岸3821 2026-03-31 9/450 2026-03-31 17:29 by 唐沐儿
[考研] 求调剂 +8 11ggg 2026-03-30 8/400 2026-03-31 13:56 by nanaliuyun
[考研] 11408总分309，一志愿东南大学求调剂，不挑专业 +5 天赋带到THU 2026-03-29 6/300 2026-03-30 20:49 by dick_runner
[考研] 303求调剂 +7 DLkz1314. 2026-03-30 7/350 2026-03-30 16:05 by shuang5186
[考研] 295求调剂 +5 1428151015 2026-03-27 6/300 2026-03-28 04:04 by fmesaito
[考研] 085602化学工程求调剂。 +4 平乐乐乐 2026-03-26 4/200 2026-03-26 17:57 by fmesaito
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭