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张爽00100金虫 (小有名气)
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关于双酶切 已有1人参与
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| 最近在做两个双酶切，NcoI和BamH I;BamH I和XhoI ;都是MBI的，双酶切的buffer分别是1*tango和2*tango，和酶一起的都是10*buffer tango，要稀释吗？还有双酶切的体系一般是怎样的，之前师姐实验做的都是50ul：酶各1ul、DNA 10ul、10*buffer 5ul 、ddH2O 33ul。但是做两次都没有做出来，希望各路大侠赐教。 |
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zct2008
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【答案】应助回帖
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感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+4, 鼓励交流 2013-12-11 09:59:17
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kx444555: 金币+4, 鼓励交流 2013-12-11 09:59:17
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首先你的反应体系应该是对的，没有什么问题。建议你看一下这两个双酶切：NcoI和BamH I;BamH I和XhoI，每一种酶各自的buffer是什么，双酶切时是否通用。例如BamH I和XhoI 这两个酶Takara公司的分别是buffer K和buffer H，双酶切时Takara公司建议使用1*buffer K。由于我没有用过MBI的限制性内切酶，不清楚MBI公司针对这几种酶的buffer是什么，但是原理应该是一样的。所以建议你检查一下所以的buffer是否合适。 另外，酶切时可以在50ul 反应体系中加1ul的BSA，保护酶， 有利于酶切反应。同时在酶切时建议每隔10min轻轻混匀一下，保证酶切充分。 如果实在不行就只好分开做单酶切了。 希望对你有帮助。  |
3楼2013-12-11 08:50:33
2楼2013-12-11 08:41:41
张爽00100
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5楼2013-12-11 08:56:56
30