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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 如何切开两个离得很近的内切酶位点
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yanzixiang

银虫 (小有名气)

[求助] 如何切开两个离得很近的内切酶位点

Sample TextSample Text请教大神，如何把这两个位点同时切开啊
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1楼 2013-12-06 13:24:25
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yanzixiang

银虫 (小有名气)
ggatcc tctaga这两个位点之间一见碱基也没有，请问有没有方法使他们被同时切开啊，载体上只有这两个位点我的基因片段上没有，求大神指导。小弟不胜感激
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2楼2013-12-06 13:26:29
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
2楼: Originally posted by yanzixiang at 2013-12-06 13:26:29
ggatcc tctaga这两个位点之间一见碱基也没有，请问有没有方法使他们被同时切开啊，载体上只有这两个位点我的基因片段上没有，求大神指导。小弟不胜感激

你这个是BamHI和XbaI的酶切位点，按照普通的双酶切就可以，没有问题
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3楼2013-12-06 14:30:20
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deguohan

至尊木虫 (职业作家)

教授、博/硕导

【答案】应助回帖

★ ★
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gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-12-07 00:20:30
两个离得很近的内切酶位点也不影响你酶切的效果啊，直接双酶切就OK了，只要2个酶之间可以作双酶切即可！！！！！
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天道酬勤，厚德载物
4楼2013-12-06 14:54:22
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zh10246

铁杆木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励交流！ 2013-12-07 00:20:40
YOU CAN DO sequential digest.
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5楼2013-12-06 15:13:04
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yanzixiang

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by gyesang at 2013-12-06 14:30:20
你这个是BamHI和XbaI的酶切位点，按照普通的双酶切就可以，没有问题...

做过几次了，双酶切过的载体自连严重，挑不到连接目的片段的克隆
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6楼2013-12-08 22:07:40
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yanzixiang

银虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by deguohan at 2013-12-06 14:54:22
两个离得很近的内切酶位点也不影响你酶切的效果啊，直接双酶切就OK了，只要2个酶之间可以作双酶切即可！！！！！

可是为什么切开后连接片段都是自连啊
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7楼2013-12-08 22:09:00
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by yanzixiang at 2013-12-08 22:07:40
做过几次了，双酶切过的载体自连严重，挑不到连接目的片段的克隆...

有载体自连，那你酶切载体的量是多少呢？

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
8楼2013-12-09 00:59:54
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b6122

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你先用bamhi切，切断后剩下的那个g/c作为xbai的保护碱基再切。如果先被xbai切开了，bamhi的保护碱基就是一个a/t,可能保护不了。我说的是根据neb提供的保护碱基列表推测的，不一定对，你需要自己尝试一下。

[ 发自小木虫客户端 ]
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9楼2013-12-09 02:07:12
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yanzixiang

银虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by b6122 at 2013-12-09 02:07:12
你先用bamhi切，切断后剩下的那个g/c作为xbai的保护碱基再切。如果先被xbai切开了，bamhi的保护碱基就是一个a/t,可能保护不了。我说的是根据neb提供的保护碱基列表推测的，不一定对，你需要自己尝试一下。
...

我查的NEB保护碱基表，用g/c作为xbai的保护碱基，切20个小时也是0啊
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10楼2013-12-09 10:25:02
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