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yanzixiang

银虫 (小有名气)

[求助] 如何切开两个离得很近的内切酶位点

Sample TextSample Text请教大神,如何把这两个位点同时切开啊
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yanzixiang

银虫 (小有名气)

ggatcc tctaga这两个位点之间一见碱基也没有,请问有没有方法使他们被同时切开啊,载体上只有这两个位点我的基因片段上没有,求大神指导。小弟不胜感激
2楼2013-12-06 13:26:29
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

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【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
引用回帖:
2楼: Originally posted by yanzixiang at 2013-12-06 13:26:29
ggatcc tctaga这两个位点之间一见碱基也没有,请问有没有方法使他们被同时切开啊,载体上只有这两个位点我的基因片段上没有,求大神指导。小弟不胜感激

你这个是BamHI和XbaI的酶切位点,按照普通的双酶切就可以,没有问题
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
3楼2013-12-06 14:30:20
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deguohan

至尊木虫 (职业作家)

教授、博/硕导

【答案】应助回帖

★ ★
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gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2013-12-07 00:20:30
两个离得很近的内切酶位点也不影响你酶切的效果啊,直接双酶切就OK了,只要2个酶之间可以作双酶切即可!!!!!
天道酬勤,厚德载物
4楼2013-12-06 14:54:22
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zh10246

铁杆木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖


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gyesang: 金币+1, 鼓励交流! 2013-12-07 00:20:40
YOU CAN DO sequential digest.
5楼2013-12-06 15:13:04
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yanzixiang

银虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by gyesang at 2013-12-06 14:30:20
你这个是BamHI和XbaI的酶切位点,按照普通的双酶切就可以,没有问题...

做过几次了,双酶切过的载体自连严重,挑不到连接目的片段的克隆
6楼2013-12-08 22:07:40
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yanzixiang

银虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by deguohan at 2013-12-06 14:54:22
两个离得很近的内切酶位点也不影响你酶切的效果啊,直接双酶切就OK了,只要2个酶之间可以作双酶切即可!!!!!

可是为什么切开后连接片段都是自连啊
7楼2013-12-08 22:09:00
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by yanzixiang at 2013-12-08 22:07:40
做过几次了,双酶切过的载体自连严重,挑不到连接目的片段的克隆...

有载体自连,那你酶切载体的量是多少呢?

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
8楼2013-12-09 00:59:54
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b6122

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你先用bamhi切,切断后剩下的那个g/c作为xbai的保护碱基再切。如果先被xbai切开了,bamhi的保护碱基就是一个a/t,可能保护不了。我说的是根据neb提供的保护碱基列表推测的,不一定对,你需要自己尝试一下。

[ 发自小木虫客户端 ]
9楼2013-12-09 02:07:12
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yanzixiang

银虫 (小有名气)

引用回帖:
9楼: Originally posted by b6122 at 2013-12-09 02:07:12
你先用bamhi切,切断后剩下的那个g/c作为xbai的保护碱基再切。如果先被xbai切开了,bamhi的保护碱基就是一个a/t,可能保护不了。我说的是根据neb提供的保护碱基列表推测的,不一定对,你需要自己尝试一下。
...

我查的NEB保护碱基表,用g/c作为xbai的保护碱基,切20个小时也是0啊
10楼2013-12-09 10:25:02
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