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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 动植物 » 综合其他 » ASA、APX、GSH、GSSG
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a71840584

金虫 (正式写手)

[求助] ASA、APX、GSH、GSSG

这些指标有没有必要都测呢？是不是有重复的?测APX是不是不用测ASA了？APX变化趋势和ASA是一致的还是相反的？GSH-ASA是一个循环吧，要测这俩APX还有必要测嘛？还有GSH-GSSG也是一个循环吧，测了GSH还有必要测GSSG吗？
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再牛逼的肖邦也弹不出哥的忧伤。。。
1楼 2013-12-05 20:07:54
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starseacow

专家顾问 (职业作家)
究竟测哪些酶，如何组织实验，要根据你的实验目的决定，你打算用这些数据反映什么问题。可以参考一些已发表的文献，为了说明某个类似的现象或趋势，他们都用了哪些数据。
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2楼2013-12-05 22:40:32
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lp_0820

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
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xy656691: 金币+2, 有道理 2013-12-07 10:45:13
你就列出来这几个酶，谁知道你想测定什么啊？还有最后一点，你要是想测定还原态的GSH，就必然要测GSSG。因为还原性的GSH就是通过GSSG算出来的。
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3楼2013-12-06 01:28:21
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a71840584

金虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by lp_0820 at 2013-12-06 01:28:21
你就列出来这几个酶，谁知道你想测定什么啊？还有最后一点，你要是想测定还原态的GSH，就必然要测GSSG。因为还原性的GSH就是通过GSSG算出来的。

我看文献怎么是先测GSH再测GSSG呢？文献如下：
Fresh leaves (0.20 g) were homogenized in ice-cold 5% (w/v) trichloroacetic acid, centrifuged at 15,000g for 15 min, after which to 0.2 mL supernatant added 2.6 ml phosphate buffer (pH 7.7) and 0.2 mL DTNB (5,5’-Dithiobis (2-nitrobenzoic acid) (2.51 mg mL1). After 5 min at 30 C, the absorbance was determined at 412 nm. GSH content was calculated based on a standard curve
GSSG content of fresh leaves (0.1 g) was measuredaccording to the GSH and GSSG Assay Kit (Sigma, USA).
第一段说测的GSH是总的GSH嘛，测了GSH再怎么算GSSG呢？
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再牛逼的肖邦也弹不出哥的忧伤。。。
4楼2013-12-06 09:36:53
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a71840584

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by starseacow at 2013-12-05 22:40:32
究竟测哪些酶，如何组织实验，要根据你的实验目的决定，你打算用这些数据反映什么问题。可以参考一些已发表的文献，为了说明某个类似的现象或趋势，他们都用了哪些数据。

我测氧化损伤，以前只测抗氧化酶SODPODCATAPX，审稿人要求测GSH-ASA循环，所以就问问
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再牛逼的肖邦也弹不出哥的忧伤。。。
5楼2013-12-06 09:37:55
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starseacow

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【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
4楼: Originally posted by a71840584 at 2013-12-06 09:36:53
我看文献怎么是先测GSH再测GSSG呢？文献如下：
Fresh leaves (0.20 g) were homogenized in ice-cold 5% (w/v) trichloroacetic acid, centrifuged at 15,000g for 15 min, after which to 0.2 mL supernatant ad ...

找一个GSH-GSSH测定试剂盒，看看检测原理
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6楼2013-12-06 16:55:20
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a71840584

金虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by starseacow at 2013-12-06 16:55:20
找一个GSH-GSSH测定试剂盒，看看检测原理...

用不起试剂盒。。不是非得试剂盒才能测吧，发表文献有直接测GSH的..我只想知道这个GSH是总的还是什么，有测GSH、ASA但没测GSSG的，照你和楼上大哥说的这么测就不对喽？
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7楼2013-12-06 17:40:27
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starseacow

专家顾问 (职业作家)
引用回帖:
7楼: Originally posted by a71840584 at 2013-12-06 17:40:27
用不起试剂盒。。不是非得试剂盒才能测吧，发表文献有直接测GSH的..我只想知道这个GSH是总的还是什么，有测GSH、ASA但没测GSSG的，照你和楼上大哥说的这么测就不对喽？...

我的意思是你去看看试剂盒说明，就可以理解为什么要测GSH+GSSH了
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8楼2013-12-06 18:02:00
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lp_0820

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by a71840584 at 2013-12-06 09:36:53
我看文献怎么是先测GSH再测GSSG呢？文献如下：
Fresh leaves (0.20 g) were homogenized in ice-cold 5% (w/v) trichloroacetic acid, centrifuged at 15,000g for 15 min, after which to 0.2 mL supernatant ad ...

试剂盒如果用GSH于DTNB反应测定，则整个反应体系是处于循环状态的，GSH与GSSG相互转化。只有在NADPH和GR存在条件下，GSH+GSSG总量为一个定值，此时，通过与DTNB反应，GSSG转化为GSH，逐步消耗NADPH，TNB量逐步增加，通过记录412 nm吸光度可以获得总GSH+GSSG量。之后，通过特定试剂处理测定GSSG含量，两个值相减获得GSH量。关于这个反应的原理我记得不是很清楚了，可能描述有误，希望懂行的虫友指正。在很多SCI文章中的还原性GSH的测定方法也是按照这个原理的。你找的方法我是头一次见到。
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9楼2013-12-07 00:07:13
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a71840584

金虫 (正式写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by lp_0820 at 2013-12-07 00:07:13
试剂盒如果用GSH于DTNB反应测定，则整个反应体系是处于循环状态的，GSH与GSSG相互转化。只有在NADPH和GR存在条件下，GSH+GSSG总量为一个定值，此时，通过与DTNB反应，GSSG转化为GSH，逐步消耗NADPH，TNB量逐步增加 ...

非常感谢你耐心的回答，你说的这个方法我也知道，先测总的GSH再测GSSG再用总的减去GSSG含量。我就是这个地方不理解，我查我做的方向的文献（SCI）都是按我说的那种方法，先测GSH，再测GSSG，还有的只测GSH不测GSSG的，然后再测ASA, 审稿人给我建议的时候是让我测GSH-ASA循环，而没提GSH-GSSG循环。但是我是做毒理的，我的理解是我不需要测植物体内具体的GSH含量，我有对照组的，我只需要测一下对照组和染毒组的差别，要一个变化趋势，要是相同处理的话应该不会有太大差别吧，而且有SCI文献是这么做的，不知道我的理解对不对...
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10楼2013-12-07 10:25:17
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