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邵进

铜虫 (小有名气)


[交流] 用293E细胞表达蛋白和抗体,1L摇瓶只能表达1 mg蛋白,产量太低!

大家好!最近在做293E悬浮细胞表达蛋白和抗体,发现蛋白表达和抗体表达都很低。转染1L,产量只有1mg!!!

具体过程如下:
转染前一天调整细胞密度:7X105个/mL,300 mL/每瓶,共3瓶。放在摇床120rpm,8%CO2,37°培养
转染当天,细胞密度计数为1X106个/mL.1L转1mg质粒。转染试剂是PEI。具体步骤如下:
(1)1mg质粒+50 mL opti-MEM,过滤。放置5 min,1mL PEI+50 mL opti-MEM,静止5min。
(2)将50 mLPEI-MEM加到质粒中。共100mL。混匀后,静止10-15 min。
(3)最后,向3个摇瓶加质粒-PEI混合物。33.33mL/每瓶。
(4)120rpm,8%CO2,37°培养6天。

请问,怎么样提高蛋白/抗体表达量?
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lu_lu

银虫 (初入文坛)



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转染第二天后加入少量含Hepes的培养基,主要调节一下pH,补充营养   才能让细胞再高效代谢6天。
2楼2014-02-25 20:06:38
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lliu

新虫 (小有名气)



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Do you know OriP in vector ?
3楼2014-02-28 11:58:12
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mrma

金虫 (初入文坛)



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楼主,你好,请问你的293E细胞从哪里买的?我也有需要这个细胞系。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
4楼2015-09-26 06:57:18
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王少辉

新虫 (初入文坛)


5楼2015-09-26 08:02:15
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MarchZR

银虫 (小有名气)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
瞬时转染摇1L表达1mg已经不少啦,现在的瞬时转染表达技术,用1mg的质粒摇1L的培养基,也就能得到1mg的蛋白啊,但是哺乳动物细胞表达抗体可以得到很多,不止1mg啊
6楼2015-09-28 15:58:28
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