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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 细胞科学 » 用293E细胞表达蛋白和抗体，1L摇瓶只能表达1 mg蛋白，产量太低！
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邵进

铜虫 (小有名气)

[交流] 用293E细胞表达蛋白和抗体，1L摇瓶只能表达1 mg蛋白，产量太低！

大家好！最近在做293E悬浮细胞表达蛋白和抗体，发现蛋白表达和抗体表达都很低。转染1L，产量只有1mg！！！

具体过程如下：
转染前一天调整细胞密度：7X105个/mL，300 mL/每瓶，共3瓶。放在摇床120rpm，8%CO2，37°培养
转染当天，细胞密度计数为1X106个/mL.1L转1mg质粒。转染试剂是PEI。具体步骤如下：
（1）1mg质粒+50 mL opti-MEM，过滤。放置5 min，1mL PEI+50 mL opti-MEM,静止5min。
（2）将50 mLPEI-MEM加到质粒中。共100mL。混匀后，静止10-15 min。
（3）最后，向3个摇瓶加质粒-PEI混合物。33.33mL/每瓶。
（4）120rpm，8%CO2,37°培养6天。

请问，怎么样提高蛋白/抗体表达量？
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1楼 2013-12-03 16:40:43
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