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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 细胞科学 » 用293E细胞表达蛋白和抗体，1L摇瓶只能表达1 mg蛋白，产量太低！
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邵进

铜虫 (小有名气)

[交流] 用293E细胞表达蛋白和抗体，1L摇瓶只能表达1 mg蛋白，产量太低！

大家好！最近在做293E悬浮细胞表达蛋白和抗体，发现蛋白表达和抗体表达都很低。转染1L，产量只有1mg！！！

具体过程如下：
转染前一天调整细胞密度：7X105个/mL，300 mL/每瓶，共3瓶。放在摇床120rpm，8%CO2，37°培养
转染当天，细胞密度计数为1X106个/mL.1L转1mg质粒。转染试剂是PEI。具体步骤如下：
（1）1mg质粒+50 mL opti-MEM，过滤。放置5 min，1mL PEI+50 mL opti-MEM,静止5min。
（2）将50 mLPEI-MEM加到质粒中。共100mL。混匀后，静止10-15 min。
（3）最后，向3个摇瓶加质粒-PEI混合物。33.33mL/每瓶。
（4）120rpm，8%CO2,37°培养6天。

请问，怎么样提高蛋白/抗体表达量？
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1楼 2013-12-03 16:40:43
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lu_lu

银虫 (初入文坛)
★
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转染第二天后加入少量含Hepes的培养基，主要调节一下pH,补充营养   才能让细胞再高效代谢6天。
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2楼2014-02-25 20:06:38
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lliu

新虫 (小有名气)
★
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Do you know OriP in vector ?
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3楼2014-02-28 11:58:12
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mrma

金虫 (初入文坛)
★
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楼主，你好，请问你的293E细胞从哪里买的？我也有需要这个细胞系。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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4楼2015-09-26 06:57:18
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王少辉

新虫 (初入文坛)
高大上的感觉

发自小木虫Android客户端
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5楼2015-09-26 08:02:15
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MarchZR

银虫 (小有名气)
★
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瞬时转染摇1L表达1mg已经不少啦，现在的瞬时转染表达技术，用1mg的质粒摇1L的培养基，也就能得到1mg的蛋白啊，但是哺乳动物细胞表达抗体可以得到很多，不止1mg啊
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6楼2015-09-28 15:58:28
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