应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 细胞科学 » 用293E细胞表达蛋白和抗体，1L摇瓶只能表达1 mg蛋白，产量太低！
61/1返回列表
查看: 3105  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

邵进

铜虫 (小有名气)

[交流] 用293E细胞表达蛋白和抗体，1L摇瓶只能表达1 mg蛋白，产量太低！

大家好！最近在做293E悬浮细胞表达蛋白和抗体，发现蛋白表达和抗体表达都很低。转染1L，产量只有1mg！！！

具体过程如下：
转染前一天调整细胞密度：7X105个/mL，300 mL/每瓶，共3瓶。放在摇床120rpm，8%CO2，37°培养
转染当天，细胞密度计数为1X106个/mL.1L转1mg质粒。转染试剂是PEI。具体步骤如下：
（1）1mg质粒+50 mL opti-MEM，过滤。放置5 min，1mL PEI+50 mL opti-MEM,静止5min。
（2）将50 mLPEI-MEM加到质粒中。共100mL。混匀后，静止10-15 min。
（3）最后，向3个摇瓶加质粒-PEI混合物。33.33mL/每瓶。
（4）120rpm，8%CO2,37°培养6天。

请问，怎么样提高蛋白/抗体表达量？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2013-12-03 16:40:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lu_lu

银虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
转染第二天后加入少量含Hepes的培养基，主要调节一下pH,补充营养   才能让细胞再高效代谢6天。
赞一下 回复此楼
2楼2014-02-25 20:06:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lliu

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
Do you know OriP in vector ?
赞一下 回复此楼
3楼2014-02-28 11:58:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mrma

金虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
楼主，你好，请问你的293E细胞从哪里买的？我也有需要这个细胞系。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
4楼2015-09-26 06:57:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

王少辉

新虫 (初入文坛)
高大上的感觉

发自小木虫Android客户端
回复此楼
5楼2015-09-26 08:02:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

MarchZR

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
瞬时转染摇1L表达1mg已经不少啦，现在的瞬时转染表达技术，用1mg的质粒摇1L的培养基，也就能得到1mg的蛋白啊，但是哺乳动物细胞表达抗体可以得到很多，不止1mg啊
赞一下 回复此楼
6楼2015-09-28 15:58:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 邵进 的主题更新
61/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭