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用293E细胞表达蛋白和抗体，1L摇瓶只能表达1 mg蛋白，产量太低！
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大家好！最近在做293E悬浮细胞表达蛋白和抗体，发现蛋白表达和抗体表达都很低。转染1L，产量只有1mg！！！ 具体过程如下： 转染前一天调整细胞密度：7X105个/mL，300 mL/每瓶，共3瓶。放在摇床120rpm，8%CO2，37°培养 转染当天，细胞密度计数为1X106个/mL.1L转1mg质粒。转染试剂是PEI。具体步骤如下： （1）1mg质粒+50 mL opti-MEM，过滤。放置5 min，1mL PEI+50 mL opti-MEM,静止5min。 （2）将50 mLPEI-MEM加到质粒中。共100mL。混匀后，静止10-15 min。 （3）最后，向3个摇瓶加质粒-PEI混合物。33.33mL/每瓶。 （4）120rpm，8%CO2,37°培养6天。 请问，怎么样提高蛋白/抗体表达量？ |
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2楼2014-02-25 20:06:38
3楼2014-02-28 11:58:12
4楼2015-09-26 06:57:18
5楼2015-09-26 08:02:15
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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| 瞬时转染摇1L表达1mg已经不少啦，现在的瞬时转染表达技术，用1mg的质粒摇1L的培养基，也就能得到1mg的蛋白啊，但是哺乳动物细胞表达抗体可以得到很多，不止1mg啊 |
6楼2015-09-28 15:58:28