应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 蛋白纯化
81/1返回列表
查看: 810  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

向日葵gl

新虫 (初入文坛)

[求助] 蛋白纯化

最近在纯化鸡蛋中的OVT，以前一直很稳定的，但是从暑假开始就分不出来了，条带不干净，换了方法，还是不纯，又没有明显的杂带。怎么办，又没有前辈遇到过类似的问题，真心求教！！！
图上第一个是marker，第二、三、四是我纯化的蛋白，理论上来说，即使有杂带也不该是在阴影处。
蛋白纯化
2345截图20131129184332.png
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2013-11-29 18:53:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiaomiao123

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2013-11-30 12:16:35
向日葵gl: 金币+3, ★★★很有帮助, 确实是胶有问题，浓缩胶缓冲液被污染了 2013-11-30 17:50:24
是不是Ḃ胶片有问题？没有其他杂峰的话

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
2楼2013-11-29 19:12:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

向日葵gl

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by xiaomiao123 at 2013-11-29 19:12:26
是不是Ḃ胶片有问题？没有其他杂峰的话

这块胶的分离胶浓度是12%的，换过10%和15%的，都不行。
赞一下 回复此楼
3楼2013-11-29 19:19:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2013-11-30 12:16:43
向日葵gl: 金币+2, ★有帮助 2013-11-30 17:50:48
样品用的什么方法纯化的？最终buffer的成分是什么？上样buffer是新配置的吗？
赞一下 回复此楼
4楼2013-11-30 08:54:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

向日葵gl

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-11-30 08:54:18
样品用的什么方法纯化的？最终buffer的成分是什么？上样buffer是新配置的吗？

柱材是DEAE Sepharose FF， 缓冲液是Tris-HCl, 目标蛋白是用缓冲液加盐洗脱，所有的溶液都是现配现用，洗脱峰分的很开，但是蛋白跑电泳却是这样的结果。我也试过改变盐浓度，但是结果都不理想。
赞一下 回复此楼
5楼2013-11-30 16:49:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 向日葵gl at 2013-11-30 16:49:16
柱材是DEAE Sepharose FF， 缓冲液是Tris-HCl, 目标蛋白是用缓冲液加盐洗脱，所有的溶液都是现配现用，洗脱峰分的很开，但是蛋白跑电泳却是这样的结果。我也试过改变盐浓度，但是结果都不理想。...

样品最后除盐了吗？盐浓度高了PAGE也会有很大影响。
赞一下 回复此楼
6楼2013-12-01 02:23:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fuyuandj86

版主 (著名写手)

己所不欲，勿施于人
看起来条带有些往下拖尾
如果不是跑胶的问题的话,有可能是蛋白在纯化过程中被降解了
赞一下 回复此楼
The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.
7楼2013-12-02 04:34:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Allen206

银虫 (小有名气)
取未纯化原样品跑一下，看阴影处是否有带，没有就是纯化过程中降解了，有就是杂带，换成15或30Q, 几种填料都试一下
赞一下 回复此楼
不想说什么，，，，
8楼2013-12-02 09:48:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 向日葵gl 的主题更新
81/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[博后之家] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 5/250 2026-08-29 21:22 by 4qO8zhfjr2AX
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 11/550 2026-08-29 20:18 by 63GmZBFV29mG
[基金申请] 有没有仍没收到信息的 +5 德尚中行 2026-08-27 6/300 2026-08-29 18:10 by manplx
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +5 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 8/400 2026-08-29 17:22 by 4FFAWE8HcgUD
[基金申请] 为什么到现在没收到通知？ +4 tannykie 2026-08-29 4/200 2026-08-29 17:14 by lmz0216
[论文投稿] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 4/200 2026-08-29 14:13 by jCd0dEvKHShX
[基金申请] 麻烦专家们看看评委们的意见（F口面上） +5 gdd2018 2026-08-28 10/500 2026-08-29 14:10 by Jacob678
[考研] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 6/300 2026-08-29 11:40 by jCd0dEvKHShX
[基金申请] 2026年叶企孙基金 +4 bud_bud 2026-08-27 7/350 2026-08-29 07:23 by foolishmani
[基金申请] 基金不中，共勉 +11 eulota 2026-08-26 11/550 2026-08-28 14:22 by 火星超人xi
[基金申请] 怎么查啊 +6 huang1991js 2026-08-26 6/300 2026-08-28 08:42 by winsaint
[基金申请] 哪位高人中了，把查询到的截图贴出来让我看看，让我长长见识 +5 yuleib84 2026-08-26 6/300 2026-08-28 00:02 by yudaoqian88
[基金申请] 面上合作单位盖章 +5 ssyjh 2026-08-27 5/250 2026-08-27 20:50 by gdfollow
[基金申请] 申请删除本帖 +6 lyz123lyz 2026-08-27 7/350 2026-08-27 17:31 by 宁静致远sy
[基金申请] 怎么看青基中了没有啊 +5 叶九微 2026-08-26 5/250 2026-08-27 10:35 by l_zh2008
[基金申请] 为什么国自然不能直接公布 +4 bjdxyxy 2026-08-26 4/200 2026-08-26 13:12 by qingmu1201
[基金申请] 国合里面能看到了 +7 一怀馨秋 2026-08-26 7/350 2026-08-26 11:23 by zhaosm1982
[基金申请] 在坚冰还盖着北海的时候，我看到了怒放的梅花。 (金币+10) +6 ziyangfang 2026-08-25 9/450 2026-08-25 20:26 by huagongfeihu
[基金申请] 明天应该可查了！？ +6 chengyan1220 2026-08-23 6/300 2026-08-25 19:45 by zfd97
[基金申请] 某些机构，以效率低为荣，以效率低作为存在感 +9 yuleib84 2026-08-25 10/500 2026-08-25 17:14 by alexon
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭