24小时热门版块排行榜

新虫 (初入文坛)

[求助] 蛋白纯化

最近在纯化鸡蛋中的OVT，以前一直很稳定的，但是从暑假开始就分不出来了，条带不干净，换了方法，还是不纯，又没有明显的杂带。怎么办，又没有前辈遇到过类似的问题，真心求教！！！
图上第一个是marker，第二、三、四是我纯化的蛋白，理论上来说，即使有杂带也不该是在阴影处。

2345截图20131129184332.png

1楼 2013-11-29 18:53:18

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

新虫 (初入文坛)

引用回帖:

2楼: Originally posted by xiaomiao123 at 2013-11-29 19:12:26
是不是Ḃ胶片有问题？没有其他杂峰的话

这块胶的分离胶浓度是12%的，换过10%和15%的，都不行。

3楼2013-11-29 19:19:58

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

新虫 (初入文坛)

引用回帖:

4楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-11-30 08:54:18
样品用的什么方法纯化的？最终buffer的成分是什么？上样buffer是新配置的吗？

柱材是DEAE Sepharose FF，缓冲液是Tris-HCl, 目标蛋白是用缓冲液加盐洗脱，所有的溶液都是现配现用，洗脱峰分的很开，但是蛋白跑电泳却是这样的结果。我也试过改变盐浓度，但是结果都不理想。

5楼2013-11-30 16:49:16

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

相关版块跳转我要订阅楼主向日葵gl 的主题更新