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moemoe

新虫 (初入文坛)

[求助] 请教一种合适的测蛋白质含量的方法?凯氏定氮还是BCA

我做的是发酵液中蛋白质含量的测定,发酵后样品中三氯乙酸可溶性氮含量的测定,想请教各位大侠用凯氏定氮法比较好还是BCA试剂盒测的准确?我样品中TCA-NSI含量不高,最高也只有百分之二多, 求助各位前辈指点!!感激不尽!!
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cccooo000

禁虫 (初入文坛)

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6楼2013-11-24 19:05:56
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dennistt

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
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silicare: 金币+2, 谢谢参与 2013-11-29 09:18:49
BCA 试剂盒是基于在碱性条件下,Cu2+ 被蛋白还原成Cu+,进而发生高敏感性和选择性的颜色变化,通过分光测定,精确定量蛋白质浓度。 与Bradford 蛋白检测一起并列成为最为准确的两种蛋白浓度检测方法。
其特点在于1、高兼容性,尤其适用于表面活性剂存在下的蛋白浓度检测,如细胞或组织的蛋白提取物。2、高敏感度。可精确定量 1~2000 μg/ml 蛋白样品。
BCA试剂一般不受绝大部分样品中的化学物质的影响,可兼容样品中高达5%的SDS,5%的TritonX-100,5%的Tween20,60,80。但受螯合剂和略高浓度的还原剂的影响,需确保EDTA低于1 mM,β-巯基乙醇低于10 mM,无EGTA,二硫苏糖醇低于1 mM,β-巯基乙醇低于1 mM。
凯氏定氮法灵敏度低,用于0.2~ 1.0mg氮,误差为±2%,费时8~10h。但非蛋白氮会对其有干扰。
就你的检测样品,我觉得BCA肯定更为合适。
2楼2013-11-23 19:27:57
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RXMCDM

版主 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

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凯氏定氮法是测定蛋白质的参考方法,BCA试剂盒达不是参考方法!
3楼2013-11-23 20:02:10
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hl16010921

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
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silicare: 金币+4, BioEPI+1, 谢谢参与 2013-11-29 09:19:22
凯氏定氮法要求除蛋白外不含其它氮元素,LZ的发酵液不能保证没有其他含氮的物质,因此不适用。BCA在不影响还原的情况下是比较准确的。

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4楼2013-11-23 20:44:22
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