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moemoe

新虫 (初入文坛)

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[求助] 请教一种合适的测蛋白质含量的方法？凯氏定氮还是BCA

我做的是发酵液中蛋白质含量的测定，发酵后样品中三氯乙酸可溶性氮含量的测定，想请教各位大侠用凯氏定氮法比较好还是BCA试剂盒测的准确？我样品中TCA-NSI含量不高，最高也只有百分之二多，求助各位前辈指点！！感激不尽！！

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1楼 2013-11-22 21:33:38

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moemoe

新虫 (初入文坛)

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引用回帖:

3楼: Originally posted by RXMCDM at 2013-11-23 20:02:10
凯氏定氮法是测定蛋白质的参考方法，BCA试剂盒达不是参考方法！

有说法是凯氏定氮法是国际都承认的测定蛋白质的，但是我的样品是小分子蛋白，含量也比较少，用凯氏定氮法测还能保持准确吗？

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10楼2013-11-26 21:12:55

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dennistt

铁杆木虫 (正式写手)

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【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
silicare: 金币+2, 谢谢参与 2013-11-29 09:18:49

BCA 试剂盒是基于在碱性条件下，Cu2+ 被蛋白还原成Cu+，进而发生高敏感性和选择性的颜色变化，通过分光测定，精确定量蛋白质浓度。与Bradford 蛋白检测一起并列成为最为准确的两种蛋白浓度检测方法。
其特点在于1、高兼容性，尤其适用于表面活性剂存在下的蛋白浓度检测，如细胞或组织的蛋白提取物。2、高敏感度。可精确定量 1～2000 μg/ml 蛋白样品。
BCA试剂一般不受绝大部分样品中的化学物质的影响，可兼容样品中高达5%的SDS，5%的TritonX-100，5%的Tween20，60，80。但受螯合剂和略高浓度的还原剂的影响，需确保EDTA低于1 mM，β-巯基乙醇低于10 mM，无EGTA，二硫苏糖醇低于1 mM，β-巯基乙醇低于1 mM。
凯氏定氮法灵敏度低，用于0.2~ 1.0mg氮，误差为±2％，费时8～10h。但非蛋白氮会对其有干扰。
就你的检测样品，我觉得BCA肯定更为合适。

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2楼2013-11-23 19:27:57

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