应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 酶切问题
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
111/1返回列表
查看: 1049  |  回复: 10
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

风吹我已散

木虫 (正式写手)

[交流] 酶切问题

在19T上连了一个目的片段（大概1.6K），挑单克隆菌落培养，分别pcr和酶切验证目的片段在19T上的插入方向。根据我的目的基因的序列，选择了xbal酶切，该酶切位点在我的目的片段大概1.2K左右的位置上，也就是说如果是正向插入的话，酶切下来应该是3.9K和400bp的条带；反向插入的应该是1.2K和3.1k左右的条带。通过载体上的引物和我扩目的片段的引物pcr验证出了正向和反向插入（有正负对照）；但是酶切只能验证反向插入的（有1.2K和3.1k左右的条带），而正向插入的无400bp的条带。这个怎么解释？胶我试过1.5%和1.2%的，都没有。求帮助。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2013-11-22 10:34:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
风吹我已散: 金币+1 2013-11-22 13:08:18
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-11-22 16:23:44
酶切出来的小片段在胶上比较暗。增加点样量，应该可以看到的。
赞一下 回复此楼
2楼2013-11-22 11:22:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

风吹我已散

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-11-22 11:22:00
酶切出来的小片段在胶上比较暗。增加点样量，应该可以看到的。

我试试看哈。
回复此楼
3楼2013-11-22 13:08:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zh10246

铁杆木虫 (文坛精英)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你的目的是什么，表达还是测序，最好的方法就是测序
赞一下 回复此楼
4楼2013-11-22 14:09:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

风吹我已散

木虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by zh10246 at 2013-11-22 14:09:43
你的目的是什么，表达还是测序，最好的方法就是测序

以后要表达；老师说，先不用测序，pcr，酶切做了再说。
赞一下 回复此楼
5楼2013-11-22 14:12:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zh10246

铁杆木虫 (文坛精英)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
5楼: Originally posted by 风吹我已散 at 2013-11-22 14:12:07
以后要表达；老师说，先不用测序，pcr，酶切做了再说。...

19T是什么载体，表达载体，还是中间用的克隆载体?怎么还会有正反方向的问题，是不是设计引物的时候考虑不周全，还是没选择呢？
一般你做PCR把酶切位点加进去（用高保真的酶），酶切PCR产物和表达载体，连接直接构建表达载体，表达前测序验证正确就可以表达了。
赞一下 回复此楼
6楼2013-11-22 14:18:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

huahu3600

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
PCR假阳性率很高
我更愿意相信酶切结果
赞一下 回复此楼
7楼2013-11-22 16:18:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

风吹我已散

木虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by zh10246 at 2013-11-22 14:18:31
19T是什么载体，表达载体，还是中间用的克隆载体?怎么还会有正反方向的问题，是不是设计引物的时候考虑不周全，还是没选择呢？
一般你做PCR把酶切位点加进去（用高保真的酶），酶切PCR产物和表达载体，连接直接构 ...

PMD19-T载体，有正反向插入的问题。
赞一下 回复此楼
8楼2013-11-23 14:39:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

风吹我已散

木虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by huahu3600 at 2013-11-22 16:18:47
PCR假阳性率很高
我更愿意相信酶切结果

是啊，就是正向酶切不成功，反向酶切和pcr都没问题。
赞一下 回复此楼
9楼2013-11-23 14:40:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zh10246

铁杆木虫 (文坛精英)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 风吹我已散 at 2013-11-23 14:39:27
PMD19-T载体，有正反向插入的问题。...

这样就增加了你工作量，要选正确方向的
赞一下 回复此楼
10楼2013-11-23 14:41:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

不叶珏

铁杆木虫 (正式写手)
加大点样量！
回复此楼
11楼2013-11-23 20:27:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 风吹我已散 的主题更新
111/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料与化工272求调剂 +14 阿斯蒂芬2004 2026-03-28 14/700 2026-03-29 20:20 by dophin1985
[考研] 291求调剂 +7 Y-cap 2026-03-29 8/400 2026-03-29 19:53 by klasasda
[考研] 277跪求调剂 +6 1915668 2026-03-27 10/500 2026-03-29 16:03 by 王亮_大连医科大
[考研] 一志愿南航 335分 | 0856 | GPA 4.07 | 有科研经历 +7 cccchenso 2026-03-29 7/350 2026-03-29 15:00 by 唐沐儿
[考研] 一志愿武汉理工，总分321，英一数二，求老师收留。 +10 nnnnnnn5 2026-03-25 10/500 2026-03-29 11:42 by longlotian
[考研] 356求调剂 +4 gysy?s?a 2026-03-28 4/200 2026-03-29 10:32 by 唐沐儿
[考研] 352分-085602-一志愿985 +5 海纳百川Ly 2026-03-29 5/250 2026-03-29 09:57 by Sjndkwm
[考研] 一志愿华理，数一英一285求A区调剂 +8 AZMK 2026-03-25 12/600 2026-03-28 18:15 by AZMK
[考研] 一志愿北京工业大学，324分求调剂 +4 零八# 2026-03-28 4/200 2026-03-28 15:01 by 17865157980
[考研] 0703一志愿9，初试成绩：338，四六级已过，有科研经历，求调剂！ +4 Zuhui0306 2026-03-25 4/200 2026-03-28 13:07 by 唐沐儿
[考研] 328求调剂 +7 嗯滴的基本都 2026-03-27 7/350 2026-03-28 04:19 by fmesaito
[考研] 315分求调剂 +7 26考研上岸版26 2026-03-26 7/350 2026-03-28 04:05 by fmesaito
[考研] 070300化学求调剂 +4 起个名咋这么难 2026-03-27 4/200 2026-03-27 21:39 by 83503孙老师
[考研] 324求调剂 +5 hanamiko 2026-03-26 5/250 2026-03-27 10:33 by wangjy2002
[考研] 材料学硕，求调剂 6+5 糖葫芦888ll 2026-03-22 10/500 2026-03-27 08:18 by hypershenger
[考研] 304材料求调剂 +4 钟llll 2026-03-26 4/200 2026-03-27 03:42 by wxiongid
[考研] 求调剂 一志愿 本科 北科大 化学 343 +6 13831862839 2026-03-24 7/350 2026-03-26 22:57 by 不吃魚的貓
[考研] 302求调剂 +4 锦衣卫藤椒 2026-03-25 4/200 2026-03-25 16:29 by 功夫疯狂
[考研] 材料专硕找调剂 +5 哈哈哈吼吼吼哈 2026-03-23 5/250 2026-03-24 19:07 by 了了了了。。
[考研] 333求调剂 +3 ALULU4408 2026-03-23 3/150 2026-03-23 19:04 by macy2011
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭