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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 酶切问题
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风吹我已散

木虫 (正式写手)

[交流] 酶切问题

在19T上连了一个目的片段（大概1.6K），挑单克隆菌落培养，分别pcr和酶切验证目的片段在19T上的插入方向。根据我的目的基因的序列，选择了xbal酶切，该酶切位点在我的目的片段大概1.2K左右的位置上，也就是说如果是正向插入的话，酶切下来应该是3.9K和400bp的条带；反向插入的应该是1.2K和3.1k左右的条带。通过载体上的引物和我扩目的片段的引物pcr验证出了正向和反向插入（有正负对照）；但是酶切只能验证反向插入的（有1.2K和3.1k左右的条带），而正向插入的无400bp的条带。这个怎么解释？胶我试过1.5%和1.2%的，都没有。求帮助。
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1楼 2013-11-22 10:34:19
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风吹我已散

木虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by huahu3600 at 2013-11-22 16:18:47
PCR假阳性率很高
我更愿意相信酶切结果

是啊，就是正向酶切不成功，反向酶切和pcr都没问题。
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9楼2013-11-23 14:40:18
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
风吹我已散: 金币+1 2013-11-22 13:08:18
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-11-22 16:23:44
酶切出来的小片段在胶上比较暗。增加点样量，应该可以看到的。
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2楼2013-11-22 11:22:00
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风吹我已散

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-11-22 11:22:00
酶切出来的小片段在胶上比较暗。增加点样量，应该可以看到的。

我试试看哈。
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3楼2013-11-22 13:08:31
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zh10246

铁杆木虫 (文坛精英)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你的目的是什么，表达还是测序，最好的方法就是测序
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4楼2013-11-22 14:09:43
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