应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 荧光定量求大神赐教~~~
71/1返回列表
查看: 1788  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

linsui1989

新虫 (小有名气)

[求助] 荧光定量求大神赐教~~~

我最近用RNA做标准品在建标准曲线，用的是一步法RT-PCR方法，两次做出来的曲线都很凌乱，附图两张，求分析解释。根据分光光度计的结果显示标准品原液浓度大约是10的12次方个copies，260/280=2.00, 260/230=1.69, 求分析解释。
荧光定量求大神赐教~~~
sample2(1).sds_AmpPlot.jpg


荧光定量求大神赐教~~~-1
sample2(2).sds_AmpPlot.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-11-21 16:23:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zzl2516

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2013-11-21 16:57:15
一步法是什么方法。。。从来没用过一步法。。就图形来看你这个扩增曲线都没有到平台期，现在不都是用两步法或三步法么，建议改为两步法
赞一下 回复此楼
2楼2013-11-21 16:49:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

love_st

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你的凌乱是指你各个梯度的重复做的不好还是什么？
赞一下 回复此楼
3楼2013-11-21 16:58:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

linsui1989

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by love_st at 2013-11-21 16:58:20
你的凌乱是指你各个梯度的重复做的不好还是什么？

我是10倍梯度稀释的标准品，从10的10次方开始加样，不仅重复性不好，而且PCR起峰很晚，尤其是第二张图，起峰时间都集中在后半段，根本没有梯度间的差别。
我之前建的另一个种病毒RNA的标准曲线就很稳定，（附图），实在找不出其中的原因
荧光定量求大神赐教~~~-2
lin10.24。正式.sds_AmpPlot.jpg
赞一下 回复此楼
4楼2013-11-21 19:07:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

love_st

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
gyesang: 金币+3, 鼓励交流！ 2013-11-22 16:40:53
引用回帖:
4楼: Originally posted by linsui1989 at 2013-11-21 19:07:25
我是10倍梯度稀释的标准品，从10的10次方开始加样，不仅重复性不好，而且PCR起峰很晚，尤其是第二张图，起峰时间都集中在后半段，根本没有梯度间的差别。
我之前建的另一个种病毒RNA的标准曲线就很稳定，（附图） ...

1.你的最高浓度如果是10次方的话，Ct值是偏大了点，这个可能和你引物探针扩增效率有关系，还有你的重复性不好，低浓度扩增不好，可能和你体系有关系，试着去优化下体系，调整下各试剂组份浓度，特别是你所用的酶，即使同样的酶，对于不同体系它的比例也不尽相同，都去做些许调整吧，可能会取得好的结果。
2.重复性不好除了体系的问题，很多时候是操作者的操作手法等问题，请相信，虽然PCR是个相对简单的实验，但是想做好并不是简单的事情，一两次的实验不能说明任何问题。
赞一下 回复此楼
5楼2013-11-22 09:09:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

vege的桌子

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-11-22 16:41:00
会不会是PCR产物的污染，导致在高浓度模板上影响不大，在低浓度模板时有异性，建议处理一下实验室，换一批新原料再检测
赞一下 回复此楼
6楼2013-11-22 11:00:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

linsui1989

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by vege的桌子 at 2013-11-22 11:00:28
会不会是PCR产物的污染，导致在高浓度模板上影响不大，在低浓度模板时有异性，建议处理一下实验室，换一批新原料再检测

高浓度模板影响也挺大的，10的10次方copies的模板CT值在17,和正常的也差了不少
赞一下 回复此楼
7楼2013-11-22 15:00:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 linsui1989 的主题更新
71/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 zSbvVX9JFl9J 2026-11-09 6/300 2026-11-11 07:06 by Z7qfCsdIiD1T
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 FChKX8meu1ds 2026-11-09 9/450 2026-11-11 04:54 by Z7qfCsdIiD1T
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 FChKX8meu1ds 2026-11-09 5/250 2026-11-11 04:40 by Z7qfCsdIiD1T
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 FChKX8meu1ds 2026-11-09 6/300 2026-11-11 04:32 by Z7qfCsdIiD1T
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 cqv1zKnzd7hr 2026-11-09 7/350 2026-11-11 04:21 by Z7qfCsdIiD1T
[考研] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 cqv1zKnzd7hr 2026-11-09 6/300 2026-11-11 04:12 by Z7qfCsdIiD1T
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 0TEMgxdT1eIw 2026-11-09 6/300 2026-11-11 04:10 by Z7qfCsdIiD1T
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 FChKX8meu1ds 2026-11-09 6/300 2026-11-11 01:54 by Z7qfCsdIiD1T
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 0TEMgxdT1eIw 2026-11-09 6/300 2026-11-11 01:13 by Z7qfCsdIiD1T
[考研] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +4 0TEMgxdT1eIw 2026-11-09 6/300 2026-11-11 01:10 by Z7qfCsdIiD1T
[考研] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 zSbvVX9JFl9J 2026-11-09 5/250 2026-11-11 00:59 by Z7qfCsdIiD1T
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 cqv1zKnzd7hr 2026-11-09 5/250 2026-11-10 20:45 by Z7qfCsdIiD1T
[考博] 申请环境，微生物方向博士 +3 浅笑09 2026-11-08 3/150 2026-11-10 12:44 by 可淡不可忘
[考研] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +6 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 14/700 2026-11-09 11:52 by GwrQVVR6Oenx
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +5 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 16/800 2026-11-09 11:47 by GwrQVVR6Oenx
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 12/600 2026-11-09 06:32 by l48hFd8Nwae2
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +5 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 9/450 2026-11-08 22:46 by l48hFd8Nwae2
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +6 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 12/600 2026-11-06 16:10 by 5sJFDKp2kwuI
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 10/500 2026-11-06 02:04 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 9/450 2026-11-06 02:02 by qL1cU46YIdK0
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭