应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 各位大神们 小弟求助 有一质粒我想知道里面的序列 不知道怎么弄？？？？
81/1返回列表
查看: 1454  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

zhuangkai520

金虫 (小有名气)

[求助] 各位大神们 小弟求助 有一质粒我想知道里面的序列 不知道怎么弄？？？？

我是从污水中筛选出的耐药大肠杆菌，想提取其中的有抗性基因的质粒进行测序，看后续实验对抗性基因-质粒的影响，应该怎么办呢？？？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
深圳的东北人
1楼 2013-11-15 09:42:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2013-11-15 16:12:14
我个人愚见：
1. 从该株大肠杆菌中提取出所有质粒，该大肠杆菌可能含不止一种质粒

2. 然后这些质粒的混合体转化大肠杆菌DH5a或者其他克隆菌株用你的那个药筛选

3. 阳性菌株培养提取质粒

4. 想办法测序这个质粒
赞一下(2人) 回复此楼
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
2楼2013-11-15 10:09:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jennifermatt

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-11-15 16:16:53
提取质粒，转化，amp/kana/氯霉素筛选阳性，再提质粒。10微升测序。
赞一下 回复此楼
求是
3楼2013-11-15 10:42:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhuangkai520

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gyesang at 2013-11-15 10:09:03
我个人愚见：
1. 从该株大肠杆菌中提取出所有质粒，该大肠杆菌可能含不止一种质粒

2. 然后这些质粒的混合体转化大肠杆菌DH5a或者其他克隆菌株用你的那个药筛选

3. 阳性菌株培养提取质粒

4. 想办法测序这个 ...

那这个质粒应该怎么测序啊？没什么谱？
赞一下 回复此楼
深圳的东北人
4楼2013-11-15 11:56:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhuangkai520

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by jennifermatt at 2013-11-15 10:42:20
提取质粒，转化，amp/kana/氯霉素筛选阳性，再提质粒。10微升测序。

直接测序质粒就可以吗？？
赞一下 回复此楼
深圳的东北人
5楼2013-11-15 11:56:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
zhuangkai520: 金币+10, ★★★★★最佳答案 2013-11-15 21:47:41
引用回帖:
4楼: Originally posted by zhuangkai520 at 2013-11-15 11:56:02
那这个质粒应该怎么测序啊？没什么谱？...

那就要想办法了啊，因为你不知道该质粒的序列，所以你也不好设计测序引物，可以先将这个质粒用酶降解成片段，连到一个中间载体上，然后用中间载体测序，测出一段序列后，就可以继续测序啦
赞一下 回复此楼
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
6楼2013-11-15 16:20:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zh10246

铁杆木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
先将这个质粒用酶降解成片段,连到T-easy载体上再测
赞一下(1人) 回复此楼
7楼2013-11-15 19:43:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhuangkai520

金虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by zh10246 at 2013-11-15 19:43:43
先将这个质粒用酶降解成片段,连到T-easy载体上再测

哦  了解了！
回复此楼
深圳的东北人
8楼2013-11-15 21:48:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 zhuangkai520 的主题更新
81/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 283求调剂 +8 小楼。 2026-03-12 11/550 2026-03-16 09:46 by 无际的草原
[基金申请] 国自科面上基金字体 +4 iwuli 2026-03-12 5/250 2026-03-15 17:07 by 风云无泪
[考研] 26考研一志愿中国石油大学(华东)305分求调剂 +3 嘉年新程 2026-03-15 3/150 2026-03-15 13:58 by 哈哈哈哈嘿嘿嘿
[基金申请] 现在如何回避去年的某一个专家，不知道名字 +3 zk200107 2026-03-12 6/300 2026-03-14 17:13 by zk200107
[考研] 297求调剂 +4 学海漂泊 2026-03-13 4/200 2026-03-14 11:51 by 热情沙漠
[考研] 301求调剂 +3 归零lbm 2026-03-09 3/150 2026-03-14 02:20 by JourneyLucky
[考研] 318求调剂 +3 李新光 2026-03-10 3/150 2026-03-14 00:21 by JourneyLucky
[考研] 311求调剂 +8 zchqwer 2026-03-10 8/400 2026-03-14 00:01 by JourneyLucky
[考研] 332求调剂 +3 zjy101327 2026-03-11 6/300 2026-03-13 22:48 by JourneyLucky
[考研] 材料与化工304求B区调剂 +5 邱gl 2026-03-11 6/300 2026-03-13 22:37 by JourneyLucky
[考研] 0703，333分求调剂 一志愿郑州大学-物理化学 +3 李魔女斗篷 2026-03-11 3/150 2026-03-13 22:24 by JourneyLucky
[考研] ［0860］321分求调剂，ab区皆可 +4 宝贵热 2026-03-13 4/200 2026-03-13 22:01 by 星空星月
[考研] 304求调剂 +7 7712b 2026-03-13 7/350 2026-03-13 21:42 by peike
[考研] 315求调剂 +9 小羊小羊_ 2026-03-11 10/500 2026-03-13 21:13 by SXNU李老师
[考研] 0703化学求调剂 +7 绿豆芹菜汤 2026-03-12 7/350 2026-03-13 17:25 by njzyff
[考研] 求b区学校调剂 +3 周56 2026-03-11 3/150 2026-03-13 16:20 by JourneyLucky
[考研] 【0856】化学工程（085602）313 分，本科学科评估A类院校化学工程与工艺，诚求调剂 +7 小刘快快上岸 2026-03-11 7/350 2026-03-13 16:06 by ruiyingmiao
[考研] 290求调剂 +3 ADT 2026-03-13 3/150 2026-03-13 10:19 by peike
[考研] 298求调剂 +3 Vv呀！ 2026-03-10 3/150 2026-03-10 22:40 by 剑诗杜康
[硕博家园] 木虫好像不热闹了，是不是？ +4 偏振片 2026-03-10 4/200 2026-03-10 09:51 by longwave
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭