应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 各位大神们 小弟求助 有一质粒我想知道里面的序列 不知道怎么弄？？？？
81/1返回列表
查看: 1737  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

zhuangkai520

金虫 (小有名气)

[求助] 各位大神们 小弟求助 有一质粒我想知道里面的序列 不知道怎么弄？？？？

我是从污水中筛选出的耐药大肠杆菌，想提取其中的有抗性基因的质粒进行测序，看后续实验对抗性基因-质粒的影响，应该怎么办呢？？？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
深圳的东北人
1楼 2013-11-15 09:42:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2013-11-15 16:12:14
我个人愚见：
1. 从该株大肠杆菌中提取出所有质粒，该大肠杆菌可能含不止一种质粒

2. 然后这些质粒的混合体转化大肠杆菌DH5a或者其他克隆菌株用你的那个药筛选

3. 阳性菌株培养提取质粒

4. 想办法测序这个质粒
赞一下(2人) 回复此楼
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
2楼2013-11-15 10:09:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jennifermatt

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-11-15 16:16:53
提取质粒，转化，amp/kana/氯霉素筛选阳性，再提质粒。10微升测序。
赞一下 回复此楼
求是
3楼2013-11-15 10:42:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhuangkai520

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gyesang at 2013-11-15 10:09:03
我个人愚见：
1. 从该株大肠杆菌中提取出所有质粒，该大肠杆菌可能含不止一种质粒

2. 然后这些质粒的混合体转化大肠杆菌DH5a或者其他克隆菌株用你的那个药筛选

3. 阳性菌株培养提取质粒

4. 想办法测序这个 ...

那这个质粒应该怎么测序啊？没什么谱？
赞一下 回复此楼
深圳的东北人
4楼2013-11-15 11:56:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhuangkai520

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by jennifermatt at 2013-11-15 10:42:20
提取质粒，转化，amp/kana/氯霉素筛选阳性，再提质粒。10微升测序。

直接测序质粒就可以吗？？
赞一下 回复此楼
深圳的东北人
5楼2013-11-15 11:56:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
zhuangkai520: 金币+10, ★★★★★最佳答案 2013-11-15 21:47:41
引用回帖:
4楼: Originally posted by zhuangkai520 at 2013-11-15 11:56:02
那这个质粒应该怎么测序啊？没什么谱？...

那就要想办法了啊，因为你不知道该质粒的序列，所以你也不好设计测序引物，可以先将这个质粒用酶降解成片段，连到一个中间载体上，然后用中间载体测序，测出一段序列后，就可以继续测序啦
赞一下 回复此楼
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
6楼2013-11-15 16:20:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zh10246

铁杆木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
先将这个质粒用酶降解成片段,连到T-easy载体上再测
赞一下(1人) 回复此楼
7楼2013-11-15 19:43:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhuangkai520

金虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by zh10246 at 2013-11-15 19:43:43
先将这个质粒用酶降解成片段,连到T-easy载体上再测

哦  了解了！
回复此楼
深圳的东北人
8楼2013-11-15 21:48:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 zhuangkai520 的主题更新
81/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[教师之家] 导师吐槽：我怎么摊上了这么个极品研究生！ +5 苏东坡二世 2026-08-23 5/250 2026-08-27 10:39 by 炜雨
[基金申请] 怎么看青基中了没有啊 +5 叶九微 2026-08-26 5/250 2026-08-27 10:35 by l_zh2008
[基金申请] 基金不中，共勉 +7 eulota 2026-08-26 7/350 2026-08-27 09:02 by hsding2026
[基金申请] 2026年的国家社科基金项目通讯评审的新规则与新动向、新挑战 +7 process2012 2026-08-23 10/500 2026-08-26 19:23 by hmhminy
[基金申请] 系统查不到 +10 董八千 2026-08-26 10/500 2026-08-26 16:30 by Equinoxhua
[基金申请] 2026年8月25日国自然放榜前突然收到列入评审专家邮件，有关系吗？ +25 木水思豆 2026-08-25 28/1400 2026-08-26 14:53 by draco1987
[基金申请] 出来了 +9 trojank 2026-08-26 9/450 2026-08-26 14:25 by 宝贝虫子
[基金申请] 国际合作可查了，中了面上 +18 Ldrop2023 2026-08-26 18/900 2026-08-26 11:15 by cmrandy
[基金申请] 系统进不去 +4 yanglien 2026-08-26 5/250 2026-08-26 11:10 by wenfengw83
[基金申请] 今天务委会开完了，明天出结果吗 +19 angus9576 2026-08-25 23/1150 2026-08-26 10:03 by zp519
[基金申请] 国合现在查不到了吗？ +10 chengyan1220 2026-08-24 20/1000 2026-08-26 08:57 by peasantsprig
[基金申请] 在坚冰还盖着北海的时候，我看到了怒放的梅花。 (金币+10) +6 ziyangfang 2026-08-25 9/450 2026-08-25 20:26 by huagongfeihu
[基金申请] 如果此刻你正在为国基感到焦虑，不妨来听听这首《基金之外》 +8 scalable 2026-08-24 8/400 2026-08-25 12:52 by jnhyjjm
[基金申请] 没有任何消息-是不是就凉了 +9 图啦图啦 2026-08-24 10/500 2026-08-25 11:59 by 南海小哥
[基金申请] 人气不行了 +11 fansofjerry 2026-08-21 11/550 2026-08-25 11:04 by 孤独的英雄6
[基金申请] 我面上完蛋了 +13 且听虎啸 2026-08-20 14/700 2026-08-25 09:10 by mrkang
[基金申请] 建议基金发布提前给出明确的时间点 +13 kulium 2026-08-21 16/800 2026-08-24 16:27 by superceng
[教师之家] 跳槽后在研项目怎么办？ +5 简单化xn 2026-08-22 10/500 2026-08-23 12:38 by 简单化xn
[基金申请] 应该是下周三26日公布了吧？ +4 哈哈蛤？ 2026-08-21 4/200 2026-08-21 10:58 by Vivilian
[基金申请] 基金啊基金 +4 longfie172 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:58 by mark mao
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭