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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 各位大神们 小弟求助 有一质粒我想知道里面的序列 不知道怎么弄？？？？
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zhuangkai520

金虫 (小有名气)

[求助] 各位大神们 小弟求助 有一质粒我想知道里面的序列 不知道怎么弄？？？？

我是从污水中筛选出的耐药大肠杆菌，想提取其中的有抗性基因的质粒进行测序，看后续实验对抗性基因-质粒的影响，应该怎么办呢？？？
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深圳的东北人
1楼 2013-11-15 09:42:30
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

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【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2013-11-15 16:12:14
我个人愚见：
1. 从该株大肠杆菌中提取出所有质粒，该大肠杆菌可能含不止一种质粒

2. 然后这些质粒的混合体转化大肠杆菌DH5a或者其他克隆菌株用你的那个药筛选

3. 阳性菌株培养提取质粒

4. 想办法测序这个质粒
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学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
2楼2013-11-15 10:09:03
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jennifermatt

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-11-15 16:16:53
提取质粒，转化，amp/kana/氯霉素筛选阳性，再提质粒。10微升测序。
赞一下 回复此楼
求是
3楼2013-11-15 10:42:20
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zhuangkai520

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gyesang at 2013-11-15 10:09:03
我个人愚见：
1. 从该株大肠杆菌中提取出所有质粒，该大肠杆菌可能含不止一种质粒

2. 然后这些质粒的混合体转化大肠杆菌DH5a或者其他克隆菌株用你的那个药筛选

3. 阳性菌株培养提取质粒

4. 想办法测序这个 ...

那这个质粒应该怎么测序啊？没什么谱？
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深圳的东北人
4楼2013-11-15 11:56:02
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zhuangkai520

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by jennifermatt at 2013-11-15 10:42:20
提取质粒，转化，amp/kana/氯霉素筛选阳性，再提质粒。10微升测序。

直接测序质粒就可以吗？？
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深圳的东北人
5楼2013-11-15 11:56:23
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
zhuangkai520: 金币+10, ★★★★★最佳答案 2013-11-15 21:47:41
引用回帖:
4楼: Originally posted by zhuangkai520 at 2013-11-15 11:56:02
那这个质粒应该怎么测序啊？没什么谱？...

那就要想办法了啊，因为你不知道该质粒的序列，所以你也不好设计测序引物，可以先将这个质粒用酶降解成片段，连到一个中间载体上，然后用中间载体测序，测出一段序列后，就可以继续测序啦
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学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
6楼2013-11-15 16:20:04
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zh10246

铁杆木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
先将这个质粒用酶降解成片段,连到T-easy载体上再测
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7楼2013-11-15 19:43:43
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zhuangkai520

金虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by zh10246 at 2013-11-15 19:43:43
先将这个质粒用酶降解成片段,连到T-easy载体上再测

哦  了解了！
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深圳的东北人
8楼2013-11-15 21:48:04
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