24小时热门版块排行榜    

查看: 1838  |  回复: 7

zhuangkai520

金虫 (小有名气)

[求助] 各位大神们 小弟求助 有一质粒我想知道里面的序列 不知道怎么弄????

我是从污水中筛选出的耐药大肠杆菌,想提取其中的有抗性基因的质粒进行测序,看后续实验对抗性基因-质粒的影响,应该怎么办呢???
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

深圳的东北人
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2013-11-15 16:12:14
我个人愚见:
1. 从该株大肠杆菌中提取出所有质粒,该大肠杆菌可能含不止一种质粒

2. 然后这些质粒的混合体转化大肠杆菌DH5a或者其他克隆菌株用你的那个药筛选

3. 阳性菌株培养提取质粒

4. 想办法测序这个质粒
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
2楼2013-11-15 10:09:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jennifermatt

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2013-11-15 16:16:53
提取质粒,转化,amp/kana/氯霉素筛选阳性,再提质粒。10微升测序。
求是
3楼2013-11-15 10:42:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhuangkai520

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by gyesang at 2013-11-15 10:09:03
我个人愚见:
1. 从该株大肠杆菌中提取出所有质粒,该大肠杆菌可能含不止一种质粒

2. 然后这些质粒的混合体转化大肠杆菌DH5a或者其他克隆菌株用你的那个药筛选

3. 阳性菌株培养提取质粒

4. 想办法测序这个 ...

那这个质粒应该怎么测序啊?没什么谱?
深圳的东北人
4楼2013-11-15 11:56:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhuangkai520

金虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by jennifermatt at 2013-11-15 10:42:20
提取质粒,转化,amp/kana/氯霉素筛选阳性,再提质粒。10微升测序。

直接测序质粒就可以吗??
深圳的东北人
5楼2013-11-15 11:56:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
zhuangkai520: 金币+10, ★★★★★最佳答案 2013-11-15 21:47:41
引用回帖:
4楼: Originally posted by zhuangkai520 at 2013-11-15 11:56:02
那这个质粒应该怎么测序啊?没什么谱?...

那就要想办法了啊,因为你不知道该质粒的序列,所以你也不好设计测序引物,可以先将这个质粒用酶降解成片段,连到一个中间载体上,然后用中间载体测序,测出一段序列后,就可以继续测序啦
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
6楼2013-11-15 16:20:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zh10246

铁杆木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
先将这个质粒用酶降解成片段,连到T-easy载体上再测
7楼2013-11-15 19:43:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhuangkai520

金虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by zh10246 at 2013-11-15 19:43:43
先将这个质粒用酶降解成片段,连到T-easy载体上再测

哦  了解了!
深圳的东北人
8楼2013-11-15 21:48:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 zhuangkai520 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 极限拉扯,如何抉择 +11 Isak0320 2026-10-12 15/750 2026-10-14 21:55 by 猫鱼不是鱼
[基金申请] 申请科研项目纯靠实力能成功吗? 200+5 David1982 2026-10-13 8/400 2026-10-14 21:38 by lhw_GPA4.0
[硕博家园] 中科院海洋所招收海洋材料相关领域博士研究生及研究助理 +3 sujiner 2026-10-08 4/200 2026-10-14 20:40 by qicaiyun
[职场人生] 40+中年人失业后,还能找到好工作吗? +3 xqy2009 2026-10-13 3/150 2026-10-14 20:17 by 43358052
[论文投稿] 二审4个多月了还是Awaiting Reviewer Scores 10+3 纳斯达克ML 2026-10-11 4/200 2026-10-14 17:30 by babero
[教师之家] 课题组会帮你通过考核么? +4 好运来~9527 2026-10-10 7/350 2026-10-13 08:41 by xli1984
[基金申请] 入职后第一次管课题组的专利缴费,对账才发现官费比别人多掏了一倍 +6 13108017953 2026-10-08 6/300 2026-10-12 20:07 by w3w3y3
[公派出国] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 9/450 2026-10-11 22:34 by XQNyDCa1Tk5n
[公派出国] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 22:26 by XQNyDCa1Tk5n
[找工作] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 22:26 by XQNyDCa1Tk5n
[考博] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 9/450 2026-10-11 22:15 by XQNyDCa1Tk5n
[教师之家] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 (EPI+-1)(金币-50) +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 22:06 by XQNyDCa1Tk5n
[教师之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 (EPI+-1)(金币-50) +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 14:25 by VOMexwnDzOFZ
[教师之家] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 (EPI+-1)(金币-50) +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 14:05 by VOMexwnDzOFZ
[硕博家园] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 13:45 by VOMexwnDzOFZ
[找工作] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 10:54 by VOMexwnDzOFZ
[找工作] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 10:34 by VOMexwnDzOFZ
[考博] 招收博士生一名 +3 mandolin 2026-10-10 3/150 2026-10-11 10:21 by 不是山谷!
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 4/200 2026-10-11 03:14 by M0zrYVSAnxpE
[有机交流] 我应该选哪条合成路线让实验成功率高一些? +5 jing816y 2026-10-08 9/450 2026-10-10 09:05 by zapen
信息提示
请填处理意见