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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » DNA酶I的反应液 Tris-HCl pH=7
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wangdandelia

木虫 (正式写手)

[交流] DNA酶I的反应液 Tris-HCl pH=7 已有1人参与

各位大侠好！
请问：如下的DNA 酶I from bovine pancreas(sigma DN25)的反应缓冲液的配制方法(3倍的Tris-HCl buffer，50mL定容)正确吗？
首先将Tris （3mg）及MgSO4 （60mg）溶解在40mL的水里，然后用HCl和NaOH 调pH=7，然后补足水至50mL。
我在网上搜索到正常的酶反应液10mM Tris-HCl(pH7.5), 25mM MgCl2，1mM CaCl2。计算与比较之后，发现我的步骤里面Tris质量相差极大。
请问DNA酶I的缓冲液到底该怎样配呢？先谢谢啦！

[ Last edited by wangdandelia on 2013-11-13 at 04:40 ]
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1楼 2013-11-13 03:48:23
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
laozuzunzhe: 金币+1, 鼓励交流！ 2013-11-13 17:22:08
Tris调pH只用到盐酸，不用NaOH，因为比纯tris更碱性的pH下没有缓冲作用。
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2楼2013-11-13 04:29:52
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wangdandelia

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-11-13 04:29:52
Tris调pH只用到盐酸，不用NaOH，因为比纯tris更碱性的pH下没有缓冲作用。

请问Tris的浓度到底是多少呢？

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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3楼2013-11-13 14:55:31
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by wangdandelia at 2013-11-13 14:55:31
请问Tris的浓度到底是多少呢？
...

你需要多少用多少。常用的缓冲液通常都是配成一定pH，浓度较高的母液（通常是1M）。工作液中缓冲液的浓度一般不高，你的实验需要多少，直接从母液稀释。
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4楼2013-11-14 02:45:59
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