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sunshine111铜虫 (初入文坛)
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[求助]
总脱氢酶测定TTC法求助 已有1人参与
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各位虫子们，我用TT法测总脱氢酶活性，连标准曲线都没有做出来， 步骤如下： 方法与步骤 （1）标准曲线的制备 ① 配制1mg/毫升TTC溶液：称取50.0mgTTC，置于50毫升容量瓶中，以蒸馏水定容至刻度，避光了 ② 配制不同浓度TTC液：从1mg/毫升TTC液中分别吸取1、2、3、4、5、6、7毫升放入每个容积为50毫升的一组容量瓶中，以蒸馏水定容至50毫升，各瓶中TTC浓度分别为20、40、60、80、100、120、140μg/毫升。避光了 ③ 每只带塞离心管内加入Tris-HCl缓冲液2毫升＋2毫升蒸馏水＋1毫升TTC液（从低到高浓度依次加入）；对照管加入2毫升Tris-HCl缓冲液+3毫升蒸馏水，不加入TTC，所得每只离心管TTC含量分别为20、40、60、80、100、120、140μg。避光了 ④ 每管各加入5mg的钠连二硫酸钠，混合置于暗处37℃恒温振荡20min，使TTC全部还原，生成红色的TF。 ⑤ 在各管加入5毫升丙酮（或正丁醇和甲醇），抽提TF。 ⑥ 放入37℃恒温振荡萃取10min。 在721型分光光度计上，于485nm波长下测光密度。 但是为毛线在80、100、120、140μg这几个点的吸光度一直保持在0.16左右，不再继续上升了 WHY???!! |
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3楼2018-07-09 19:17:31
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