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sunshine111

铜虫 (初入文坛)

[求助] 总脱氢酶测定TTC法求助 已有1人参与

各位虫子们,我用TT法测总脱氢酶活性,连标准曲线都没有做出来,
步骤如下: 方法与步骤
(1)标准曲线的制备
①        配制1mg/毫升TTC溶液:称取50.0mgTTC,置于50毫升容量瓶中,以蒸馏水定容至刻度,避光了
②         配制不同浓度TTC液:从1mg/毫升TTC液中分别吸取1、2、3、4、5、6、7毫升放入每个容积为50毫升的一组容量瓶中,以蒸馏水定容至50毫升,各瓶中TTC浓度分别为20、40、60、80、100、120、140μg/毫升。避光了
③         每只带塞离心管内加入Tris-HCl缓冲液2毫升+2毫升蒸馏水+1毫升TTC液(从低到高浓度依次加入);对照管加入2毫升Tris-HCl缓冲液+3毫升蒸馏水,不加入TTC,所得每只离心管TTC含量分别为20、40、60、80、100、120、140μg。避光了
④         每管各加入5mg的钠连二硫酸钠,混合置于暗处37℃恒温振荡20min,使TTC全部还原,生成红色的TF。
⑤         在各管加入5毫升丙酮(或正丁醇和甲醇),抽提TF。   
⑥        放入37℃恒温振荡萃取10min。
在721型分光光度计上,于485nm波长下测光密度。

但是为毛线在80、100、120、140μg这几个点的吸光度一直保持在0.16左右,不再继续上升了 WHY???!!
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WQS1991

银虫 (正式写手)

你好,你的这个问题解决了吗?我有几个问题也想请教呢
2楼2015-07-27 15:52:51
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喵~喵~sun

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

解决了吗,我现在也遇到这样的问题
3楼2018-07-09 19:17:31
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