24小时热门版块排行榜    

查看: 1735  |  回复: 19
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

windleakey

金虫 (小有名气)

[求助] 最近做转化快疯掉了

因为定量DNA的nano好像不好用了,所以只能通过肉眼看DNA浓度。
    酶切胶回收后跑电泳,感觉浓度还可以,可是连接转化后,就是不长菌落!
   PCR产物连T载体成功,说明连接酶没问题。用对照质粒转化成功,说明转化没问题。难道是酶切这步有什么问题吗?
   做了好多次都失败了,要崩溃了,求大神帮助啊,给些指点。
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

windleakey

金虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by yipan at 2013-11-08 14:22:36
酶切问题。酶切时最适合温度37度,不可以震荡,可以混匀,快速离心一下。酶切时间不宜过长,一般在10-15分钟。

恩,我的双酶切都是37度。10到15分钟这么短可以吗?我一般都3个小时呢?
枪吹打几次算剧烈不?我都会吹大混匀的。
9楼2013-11-08 21:40:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 20 个回答

fuyuandj86

版主 (著名写手)

己所不欲,勿施于人

肉眼看DNA浓度

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.
2楼2013-11-07 22:52:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

windleakey

金虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by fuyuandj86 at 2013-11-07 22:52:42
肉眼看DNA浓度

琼脂糖电泳嘛,看亮度了,能给些建议不
3楼2013-11-07 22:58:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰,手有余香。分子生物期待你更多精彩 2013-11-08 08:23:19
不知道你想表达啥意思?
说明白些好嘛?
是不是想将目的DNA连接至某vector呢?
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
4楼2013-11-07 23:45:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 综述论文作为代表作会不会影响评审专家的印象分? +10 yufeiwaner 2026-08-09 11/550 2026-08-10 18:47 by yufeiwaner
[基金申请] 关于代码变化问题,想知道的进来 +17 且听虎啸 2026-08-07 24/1200 2026-08-10 18:35 by zhangduo2008
[基金申请] 静等基金结果 +5 gjjjzhong 2026-08-10 16/800 2026-08-10 17:19 by Tide man
[基金申请] 我的国基提前知道中了,可是同事的操作让我实在接受不了,怎么会有这样的人 +8 家与远方 2026-08-10 11/550 2026-08-10 17:09 by 六两废铜
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +3 majunge000 2026-08-10 3/150 2026-08-10 15:46 by lch2012
[基金申请] 8月时间戳变的,举个手。玩一下,释放压力 +11 archvillain 2026-08-04 13/650 2026-08-10 14:41 by seekfind
[基金申请] 这样的filecode谁见过 +11 布布和一二 2026-08-08 22/1100 2026-08-10 11:10 by wmfsnow
[基金申请] 面上项目filecode邪修 +5 西山十月 2026-08-09 7/350 2026-08-10 07:32 by 仁砚薪传
[基金申请] fileCode有新解读? +10 Tide man 2026-08-08 18/900 2026-08-09 12:55 by 仁砚薪传
[基金申请] 关于豆爷回答的JTJC与%2F数量 +5 yang182083 2026-08-06 7/350 2026-08-08 18:29 by zhanghaozhu
[基金申请] 基金中了 +14 laoda193707 2026-08-06 14/700 2026-08-08 00:23 by 实验小白ha
[基金申请] 关于filecode +4 布布和一二 2026-08-07 7/350 2026-08-07 22:55 by zhanghaozhu
[基金申请] 娱乐 +6 Tide man 2026-08-03 6/300 2026-08-07 22:40 by 铁帽子农民
[基金申请] 听说今天filecode变了 +24 布布和一二 2026-08-06 47/2350 2026-08-07 16:02 by zhiyanjiang
[基金申请] filecode +14 等待解的谜 2026-08-06 19/950 2026-08-07 12:20 by wlwhappy
[基金申请] filecode +8 布布和一二 2026-08-06 11/550 2026-08-06 20:41 by tangpu318
[基金申请] 求各位大神看下 100+6 hpkpkpkp 2026-08-05 33/1650 2026-08-06 14:49 by zhiyanjiang
[基金申请] 影响面上的因素 +8 布布和一二 2026-08-05 11/550 2026-08-06 10:41 by 宝贝虫子
[基金申请] 有没有H口的?有收到消息的吗? +3 超级海虾 2026-08-04 3/150 2026-08-04 17:26 by 学教育滴
[基金申请] 纯娱乐,不喜欢勿喷 +7 Tide man 2026-08-04 10/500 2026-08-04 15:10 by loufangrui
信息提示
请填处理意见