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1989zb金虫 (小有名气)
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[求助]
酶切问题!
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| 最近双酶切总是不能切出自己的目的条带，用质粒去p，能够p出自己的目的条带和原来载体上面的条带，感觉应该是连接上了啊 ，为什么双酶切的时候就是切不下来呢？？？有人遇到过吗？ |
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4楼2013-11-07 10:20:50
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2楼2013-11-06 20:16:52
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【答案】应助回帖
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感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+3, 鼓励交流！ 2013-11-06 23:02:25
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gyesang: 金币+3, 鼓励交流！ 2013-11-06 23:02:25
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3、不知道大家都是怎么做酶切的，我的体会是，酶切质粒时，两个酶分别单酶切比直接双酶切效果要好很多。我有一次双酶切两次都没连出来，后来分步单酶切，连接效率几乎100%。 可以第一个酶切完后直接把体系热失活，（根据酶说明书上一般是65度20min）然后直接向里面补第二个酶 或者第一个切完后用氯仿抽提，把蛋白提出 或者中间做一次回收，这个就要考虑回收效率和损失的问题了，但是这样除蛋白最彻底 前两个方法我们这都是有人做过的，已经都很好用了 希望对你有帮助 |
3楼2013-11-06 21:21:30
5楼2013-11-07 11:48:07
