| 查看: 775 | 回复: 4 | |||
1989zb金虫 (小有名气)
|
[求助]
酶切问题!
|
| 最近双酶切总是不能切出自己的目的条带，用质粒去p，能够p出自己的目的条带和原来载体上面的条带，感觉应该是连接上了啊 ，为什么双酶切的时候就是切不下来呢？？？有人遇到过吗？ |
回复此楼» 猜你喜欢
依喜替康：新型喜树碱衍生物的研究进展
已经有1人回复
-
膀胱癌靶向治疗新选择：厄达替尼作用机制与耐药研究进展
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有101人回复
-
从水母到实验室：腔肠素的发现历程与生物发光奥秘
已经有1人回复
-
线粒体氧化磷酸化的新靶点：S-Gboxin的发现与研究进展
已经有0人回复
-
PROTAC药物开发选择VHL配体：MDK-7526以87%出口向量占有率成首选
已经有0人回复
-
MCC950：NLRP3炎症小体特异性抑制剂的科研应用与前景
已经有0人回复
-
康替唑胺研发17年：如何解决多重耐药菌感染难题
已经有0人回复
-
伊曲莫德（Etrasimod）从“肠道免疫失控”到精准靶向干预
已经有1人回复
-
西达本胺：创新HDAC抑制剂的抗肿瘤之路
已经有0人回复
gyesang
荣誉版主 (著名写手)
-
专家经验: +24 - MolEPI: 31
- 应助: 599 (博士)
- 贵宾: 2.689
- 金币: 24334.9
- 散金: 1088
- 红花: 88
- 沙发: 2
- 帖子: 2327
- 在线: 623.1小时
- 虫号: 849017
- 注册: 2009-09-16
- 性别: GG
- 专业: 细胞信号转导
- 管辖: 分子生物
2楼2013-11-06 20:16:52
anyaxiong
铁杆木虫 (知名作家)
- 应助: 61 (初中生)
- 金币: 8751.8
- 散金: 2291
- 红花: 26
- 沙发: 63
- 帖子: 8730
- 在线: 743.1小时
- 虫号: 974100
- 注册: 2010-03-17
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
【答案】应助回帖
★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+3, 鼓励交流！ 2013-11-06 23:02:25
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+3, 鼓励交流！ 2013-11-06 23:02:25
|
3、不知道大家都是怎么做酶切的，我的体会是，酶切质粒时，两个酶分别单酶切比直接双酶切效果要好很多。我有一次双酶切两次都没连出来，后来分步单酶切，连接效率几乎100%。 可以第一个酶切完后直接把体系热失活，（根据酶说明书上一般是65度20min）然后直接向里面补第二个酶 或者第一个切完后用氯仿抽提，把蛋白提出 或者中间做一次回收，这个就要考虑回收效率和损失的问题了，但是这样除蛋白最彻底 前两个方法我们这都是有人做过的，已经都很好用了 希望对你有帮助 |
3楼2013-11-06 21:21:30
沙门小rna
金虫 (正式写手)
- MolEPI: 1
- 应助: 28 (小学生)
- 金币: 1117.7
- 散金: 5
- 红花: 6
- 沙发: 6
- 帖子: 644
- 在线: 76.7小时
- 虫号: 2012528
- 注册: 2012-09-19
- 专业: 病原细菌、细菌感染与宿主
4楼2013-11-07 10:20:50
5楼2013-11-07 11:48:07