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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 材料区 » 微米和纳米 » 微纳加工 » 氨基DNA与羧基CdTe量子点的连接
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benpaopinle

金虫 (小有名气)

[求助] 氨基DNA与羧基CdTe量子点的连接

各位大侠，小虫一直尝试EDC/NHS连接氨基DNA和羧基CdTe量子点，都没能成功，参考的文献做法不大一样，但原理应该是一致的，不知问题出在哪儿，焦急等待大侠相助！！！我用的缓冲液是PB，活化液pH为6.0，50mM，不另外加盐；反应液pH为7.4，10mM，另外含有100mM的KCl！尝试用pH6.0的缓冲液溶解量子点，并加入一定量的EDC/NHS（约100倍于量子点的浓度），经活化后，放置一夜，有黑色颗粒或絮状沉淀产生，此时还有荧光，当离心后，上清液无荧光，将黑色颗粒超声分散到pH7.4的缓冲液后，再测没有荧光了！还尝试过直接用pH7.4 的缓冲液直接加EDC/NHS活化2h，后加入DNA 的，最后溶液也没了荧光。前后两次的溶液都为2mL，量子点浓度约为50nM，DNA为0.75uM！求助各位有经验的大侠相助，会追加金币！！！
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羧基活化EDC|DCC,NHS

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1楼2013-11-05 16:31:00
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benpaopinle

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by lhc19890815 at 2013-11-12 00:08:51
EDC与NHS交联

谢谢，我已经在不断尝试了，能不能说具体点？
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4楼2013-11-12 14:49:41
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lucasone

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
benpaopinle: 金币+10, ★★★很有帮助, 有知道了不少！谢谢！ 2013-11-19 10:24:58
第一种情况可以很明确的回答你，羧基稳定的量子点（MPA或者TGA），是不能在酸性条件下稳定存在的，所以你的6.0的缓冲溶液是不行的，酸性条件下会导致量子点团聚沉淀，然后没有荧光；你的第二种方法应该是正确的，一般用超滤管先小转速离心，出去溶液中多余的稳定剂或者一些Cd和稳定剂的络合物，然后用7.4的PBS重新分散量子点，随后加入EDC和NHS搅拌活化，在加入DNA或者抗原抗体搅拌反应，然后4度过夜保存，第二天用紫外，荧光，红外或者是动态光散射表征。
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9楼2013-11-18 14:48:29
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benpaopinle

金虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by lucasone at 2013-11-18 14:48:29
第一种情况可以很明确的回答你，羧基稳定的量子点（MPA或者TGA），是不能在酸性条件下稳定存在的，所以你的6.0的缓冲溶液是不行的，酸性条件下会导致量子点团聚沉淀，然后没有荧光；你的第二种方法应该是正确的，一 ...

很感谢你的回复，我倒是真没用过超滤管离心，所以在样品处理上有很大不足！其次，有关活化时间和活化后的QDs处理上我还在摸索，对条件没有把握！至于你提到的反应温度，我表示有点疑问，为什么不在室温（文献中说的，具体不清楚）或37℃下反应？关于表征的手段，我这两天又再尝试向修饰后的QDs中加入GO，来测荧光变化，以此来推断是否有修饰上，不知虫友对此有何看法或建议？希望保持联系！！！
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12楼2013-11-19 10:40:27
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ypgou123

金虫 (小有名气)
你好，我现在也在做这方面，想请教一下量子点如果修饰上了，紫外和荧光会有什么变化，也就是说如何表征量子点是否修饰上了？谢谢了
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思考力乃万力之源，行动力乃万力之本，表达力乃万力之魂，从绝望中寻找希望，人生终将辉煌！
2楼2013-11-11 21:53:54
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匿名

用户注销 (小有名气)
本帖仅楼主可见
3楼2013-11-12 00:08:51
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benpaopinle

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by ypgou123 at 2013-11-11 21:53:54
你好，我现在也在做这方面，想请教一下量子点如果修饰上了，紫外和荧光会有什么变化，也就是说如何表征量子点是否修饰上了？谢谢了

真是不好意思，关于这个问题，我也是很迷茫，没有很好的表征手段！我查过文献，也询问过师兄、老师，都没有什么好的方法啊！比如说从荧光方面，有文献报道QDs修饰上DNA后表面缺陷减少，荧光强度增强，但也有说荧光强度下降的，比如被DNA猝灭，但并没有具体说明为什么；荧光发射位置前后不变或移动很小。有关于紫外的变化，目前我也没怎么尝试，因为样品量太少，没法处理，但从文献上看，肯定有DNA的紫外峰，何况还能根据DNA的吸收强度估算每个量子点上修饰了几条DNA。除了荧光、紫外，红外也可以检测酰胺键来判断是否有修饰上。动态光散射也可以根据修饰前后QDs的水力半径来粗略估计，但样品肯定是经过离心洗脱后的了。除上面的手段外，我真不知道该怎么表征，TEM和SEM应该看不到量子点表面的DNA啊，我真的也是很纠结...说这么多，也不知道你是怎样修饰的？希望可以交流一下！
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5楼2013-11-12 15:15:56
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ypgou123

金虫 (小有名气)
supernatural: 屏蔽内容, 请不要在回帖中留下联系方式，这既是版规也是为了用户自身的信息安全考虑，联系方式可以站内留额O(∩_∩)O~ 2013-11-19 11:17:48
本帖内容被屏蔽
6楼2013-11-13 11:36:29
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huterx

金虫 (小有名气)
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7楼2013-11-17 22:19:25
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conanzzz

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

LZ，首先因为你用的CdTe QD，我觉得你那个黑色颗粒是已经破坏掉的QD成分，因为我们的CdTe沉聚破坏后就是这种情况；其次，这楼里应该也挺多关注这个EDC/NHS偶联羧基QD和氨基DNA的，但是MS大家都遇到同样的问题包括我自己也是，我个人觉得是都没有偶联上，所以无从表征。
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8楼2013-11-18 11:49:53
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benpaopinle

金虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by conanzzz at 2013-11-18 11:49:53
LZ，首先因为你用的CdTe QD，我觉得你那个黑色颗粒是已经破坏掉的QD成分，因为我们的CdTe沉聚破坏后就是这种情况；其次，这楼里应该也挺多关注这个EDC/NHS偶联羧基QD和氨基DNA的，但是MS大家都遇到同样的问题包括我 ...

好吧，还是很感谢你的回复，实属无奈啊！
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10楼2013-11-19 10:18:58
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