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benpaopinle

金虫 (小有名气)

[求助] 氨基DNA与羧基CdTe量子点的连接

各位大侠,小虫一直尝试EDC/NHS连接氨基DNA和羧基CdTe量子点,都没能成功,参考的文献做法不大一样,但原理应该是一致的,不知问题出在哪儿,焦急等待大侠相助!!!我用的缓冲液是PB,活化液pH为6.0,50mM,不另外加盐;反应液pH为7.4,10mM,另外含有100mM的KCl!尝试用pH6.0的缓冲液溶解量子点,并加入一定量的EDC/NHS(约100倍于量子点的浓度),经活化后,放置一夜,有黑色颗粒或絮状沉淀产生,此时还有荧光,当离心后,上清液无荧光,将黑色颗粒超声分散到pH7.4的缓冲液后,再测没有荧光了!还尝试过直接用pH7.4 的缓冲液直接加EDC/NHS活化2h,后加入DNA 的,最后溶液也没了荧光。前后两次的溶液都为2mL,量子点浓度约为50nM,DNA为0.75uM!求助各位有经验的大侠相助,会追加金币!!!
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羧基活化EDC|DCC,NHS

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benpaopinle

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by ypgou123 at 2013-11-11 21:53:54
你好,我现在也在做这方面,想请教一下量子点如果修饰上了,紫外和荧光会有什么变化,也就是说如何表征量子点是否修饰上了?谢谢了

真是不好意思,关于这个问题,我也是很迷茫,没有很好的表征手段!我查过文献,也询问过师兄、老师,都没有什么好的方法啊!比如说从荧光方面,有文献报道QDs修饰上DNA后表面缺陷减少,荧光强度增强,但也有说荧光强度下降的,比如被DNA猝灭,但并没有具体说明为什么;荧光发射位置前后不变或移动很小。有关于紫外的变化,目前我也没怎么尝试,因为样品量太少,没法处理,但从文献上看,肯定有DNA的紫外峰,何况还能根据DNA的吸收强度估算每个量子点上修饰了几条DNA。除了荧光、紫外,红外也可以检测酰胺键来判断是否有修饰上。动态光散射也可以根据修饰前后QDs的水力半径来粗略估计,但样品肯定是经过离心洗脱后的了。除上面的手段外,我真不知道该怎么表征,TEM和SEM应该看不到量子点表面的DNA啊,我真的也是很纠结...说这么多,也不知道你是怎样修饰的?希望可以交流一下!
5楼2013-11-12 15:15:56
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ypgou123

金虫 (小有名气)

你好,我现在也在做这方面,想请教一下量子点如果修饰上了,紫外和荧光会有什么变化,也就是说如何表征量子点是否修饰上了?谢谢了
思考力乃万力之源,行动力乃万力之本,表达力乃万力之魂,从绝望中寻找希望,人生终将辉煌!
2楼2013-11-11 21:53:54
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benpaopinle

金虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by lhc19890815 at 2013-11-12 00:08:51
EDC与NHS交联

谢谢,我已经在不断尝试了,能不能说具体点?
4楼2013-11-12 14:49:41
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huterx

金虫 (小有名气)

关注一下
7楼2013-11-17 22:19:25
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