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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 食源性致病菌检测
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寒江雪0623

铜虫 (初入文坛)

[求助] 食源性致病菌检测

小硕课题研究食源性致病菌快速检测，主要采用免疫磁珠富集菌，浓缩后的菌液上免疫层析试纸条。现在的问题是免疫磁珠捕获菌后洗脱率较低，各种酸性、碱性缓冲液、加热均试过都没有效果。求各位大神这个问题怎么解决？磁珠表面偶联有抗体，可以捕获菌体，如何保证菌体洗脱下来，又不至于使蛋白变性？
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QQ:626172471
1楼 2013-11-05 10:28:07
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

原罪的祷告

金虫 (正式写手)

慧耘生物

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
寒江雪0623: 金币+5, ★有帮助 2013-11-12 18:18:41
捕获了就很难再洗脱下来吧！
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2楼2013-11-05 12:00:49
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dllchina

木虫 (著名写手)

有机的微生物大神

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
寒江雪0623: 金币+5, ★有帮助 2013-11-12 18:18:59
你做的这个别人也有做过啊，参考一下华中农业大学的硕士毕业论文吧，说不定以后还有更多的问题可以从这里解决。http://www.doc88.com/p-0037332652803.html
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3楼2013-11-05 12:24:25
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原罪的祷告

金虫 (正式写手)

慧耘生物
★
laozuzunzhe: 金币+1, 鼓励交流！ 2013-11-06 14:20:08
引用回帖:
4楼: Originally posted by 寒江雪0623 at 2013-11-05 12:57:41
不洗脱的话，上试纸条对层析有影响...

如果对层析有影响，你可以试试ELISA或者PCR检测啊！如果只能用试纸条检测，也可以试试别的方法，或者可以把捕获菌的磁珠在培养基上培养一下，产生新的菌再用试纸条检测！
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6楼2013-11-05 13:14:46
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王贤卓

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
寒江雪0623: 金币+5 2013-11-12 18:19:06
南昌大学食品科学与工程国家重点实验室。。。。魏华老师的课题组，在做这方面很牛的！！！
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7楼2013-11-05 14:08:22
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原罪的祷告

金虫 (正式写手)

慧耘生物
引用回帖:
8楼: Originally posted by 寒江雪0623 at 2013-11-05 14:12:52
课题申请的就是免疫层析的方法，看到有别的文献上说可以用加热、加一种变性剂洗脱下来，但自己做的结果不理想，这个免疫磁珠逮到菌体的作用力很强吗？...

一般来说，免疫磁珠跟ＥＬＩＳＡ和ＰＣＲ结合做的比较多，跟胶体金结合做的就很少了，应该是考虑到胶体金在稳定性上不如前者，有可能你洗脱下来了，用胶体金检测却不理想！
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11楼2013-11-05 14:37:24
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寒江雪0623

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 原罪的祷告 at 2013-11-05 12:00:49
捕获了就很难再洗脱下来吧！

不洗脱的话，上试纸条对层析有影响
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QQ:626172471
4楼2013-11-05 12:57:41
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寒江雪0623

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by dllchina at 2013-11-05 12:24:25
你做的这个别人也有做过啊，参考一下华中农业大学的硕士毕业论文吧，说不定以后还有更多的问题可以从这里解决。http://www.doc88.com/p-0037332652803.html

他们只是做了免疫磁珠，没有洗脱这步
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QQ:626172471
5楼2013-11-05 12:58:06
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寒江雪0623

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 原罪的祷告 at 2013-11-05 13:14:46
如果对层析有影响，你可以试试ELISA或者PCR检测啊！如果只能用试纸条检测，也可以试试别的方法，或者可以把捕获菌的磁珠在培养基上培养一下，产生新的菌再用试纸条检测！...

课题申请的就是免疫层析的方法，看到有别的文献上说可以用加热、加一种变性剂洗脱下来，但自己做的结果不理想，这个免疫磁珠逮到菌体的作用力很强吗？
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8楼2013-11-05 14:12:52
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寒江雪0623

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 王贤卓 at 2013-11-05 14:08:22
南昌大学食品科学与工程国家重点实验室。。。。魏华老师的课题组，在做这方面很牛的！！！

看过他们的文章 不过涉及磁珠洗脱的就很少，只报道过一篇用加热洗脱的。
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QQ:626172471
9楼2013-11-05 14:14:37
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寒江雪0623

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 原罪的祷告 at 2013-11-05 13:14:46
如果对层析有影响，你可以试试ELISA或者PCR检测啊！如果只能用试纸条检测，也可以试试别的方法，或者可以把捕获菌的磁珠在培养基上培养一下，产生新的菌再用试纸条检测！...

关于洗脱的文献还是很少，大多数像大哥说的，不洗脱直接ELISA PCR，还有就是培养后上胶体金试纸条的，但加上培养就延长检测时间了，我们做的是快速检测。
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QQ:626172471
10楼2013-11-05 14:18:09
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