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寒江雪0623

铜虫 (初入文坛)

[求助] 食源性致病菌检测

小硕课题研究食源性致病菌快速检测,主要采用免疫磁珠富集菌,浓缩后的菌液上免疫层析试纸条。现在的问题是免疫磁珠捕获菌后洗脱率较低,各种酸性、碱性缓冲液、加热均试过都没有效果。求各位大神这个问题怎么解决?磁珠表面偶联有抗体,可以捕获菌体,如何保证菌体洗脱下来,又不至于使蛋白变性?
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原罪的祷告

金虫 (正式写手)

慧耘生物


【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
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寒江雪0623: 金币+5, 有帮助 2013-11-12 18:18:41
捕获了就很难再洗脱下来吧!
2楼2013-11-05 12:00:49
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dllchina

木虫 (著名写手)

有机的微生物大神

【答案】应助回帖

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寒江雪0623: 金币+5, 有帮助 2013-11-12 18:18:59
你做的这个别人也有做过啊,参考一下华中农业大学的硕士毕业论文吧,说不定以后还有更多的问题可以从这里解决。http://www.doc88.com/p-0037332652803.html
3楼2013-11-05 12:24:25
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原罪的祷告

金虫 (正式写手)

慧耘生物



laozuzunzhe: 金币+1, 鼓励交流! 2013-11-06 14:20:08
引用回帖:
4楼: Originally posted by 寒江雪0623 at 2013-11-05 12:57:41
不洗脱的话,上试纸条对层析有影响...

如果对层析有影响,你可以试试ELISA或者PCR检测啊!如果只能用试纸条检测,也可以试试别的方法,或者可以把捕获菌的磁珠在培养基上培养一下,产生新的菌再用试纸条检测!
6楼2013-11-05 13:14:46
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王贤卓

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
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寒江雪0623: 金币+5 2013-11-12 18:19:06
南昌大学食品科学与工程国家重点实验室。。。。魏华老师的课题组,在做这方面很牛的!!!
7楼2013-11-05 14:08:22
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原罪的祷告

金虫 (正式写手)

慧耘生物


引用回帖:
8楼: Originally posted by 寒江雪0623 at 2013-11-05 14:12:52
课题申请的就是免疫层析的方法,看到有别的文献上说可以用加热、加一种变性剂洗脱下来,但自己做的结果不理想,这个免疫磁珠逮到菌体的作用力很强吗?...

一般来说,免疫磁珠跟ELISA和PCR结合做的比较多,跟胶体金结合做的就很少了,应该是考虑到胶体金在稳定性上不如前者,有可能你洗脱下来了,用胶体金检测却不理想!
11楼2013-11-05 14:37:24
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寒江雪0623

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 原罪的祷告 at 2013-11-05 12:00:49
捕获了就很难再洗脱下来吧!

不洗脱的话,上试纸条对层析有影响
QQ:626172471
4楼2013-11-05 12:57:41
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寒江雪0623

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by dllchina at 2013-11-05 12:24:25
你做的这个别人也有做过啊,参考一下华中农业大学的硕士毕业论文吧,说不定以后还有更多的问题可以从这里解决。http://www.doc88.com/p-0037332652803.html

他们只是做了免疫磁珠,没有洗脱这步
QQ:626172471
5楼2013-11-05 12:58:06
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寒江雪0623

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 原罪的祷告 at 2013-11-05 13:14:46
如果对层析有影响,你可以试试ELISA或者PCR检测啊!如果只能用试纸条检测,也可以试试别的方法,或者可以把捕获菌的磁珠在培养基上培养一下,产生新的菌再用试纸条检测!...

课题申请的就是免疫层析的方法,看到有别的文献上说可以用加热、加一种变性剂洗脱下来,但自己做的结果不理想,这个免疫磁珠逮到菌体的作用力很强吗?
QQ:626172471
8楼2013-11-05 14:12:52
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寒江雪0623

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 王贤卓 at 2013-11-05 14:08:22
南昌大学食品科学与工程国家重点实验室。。。。魏华老师的课题组,在做这方面很牛的!!!

看过他们的文章 不过涉及磁珠洗脱的就很少,只报道过一篇用加热洗脱的。
QQ:626172471
9楼2013-11-05 14:14:37
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寒江雪0623

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 原罪的祷告 at 2013-11-05 13:14:46
如果对层析有影响,你可以试试ELISA或者PCR检测啊!如果只能用试纸条检测,也可以试试别的方法,或者可以把捕获菌的磁珠在培养基上培养一下,产生新的菌再用试纸条检测!...

关于洗脱的文献还是很少,大多数像大哥说的,不洗脱直接ELISA PCR,还有就是培养后上胶体金试纸条的,但加上培养就延长检测时间了,我们做的是快速检测。
QQ:626172471
10楼2013-11-05 14:18:09
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