| 查看: 2535 | 回复: 12 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
[求助]
克隆转化，转化子就是不含目的基因。
|
||
|
我的目的基因是750bp，质粒载体是PET-24a。 我从我师兄的菌提取质粒，然后用KOD酶PCR目的基因。 然后两步酶切质粒和目的基因。NdeI酶切，胶回收，再BamHI酶切，再回收。酶切时间是3个小时以上。 提质粒、PCR、回收后都有电泳检测，条带位置正确。 然后用东洋纺的高效链接液链接目的基因和质粒的酶切片段。连接时间大概时2个小时以上。 转化到感受态细胞JM109，热击法。 然后培养在含Kan+的平板上。 第一次没有长，第二次4个平板，只有一个平板上长了3个，第三次，4个平板上都有，每个大约3—5个。 PCR检测，都没有P出目的片段。 想请教下各位大神，大概会是什么问题，那些地方需要改进。 |
回复此楼» 猜你喜欢
GSPT1口服分子胶降解剂MRT-2359 | Biochempartner
已经有0人回复
-
碳青霉烯类抗生素为何需联用西司他丁钠？ | Biochempartner
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有233人回复
-
源自蕨类植物的抗炎美白活性分子去甲氧基荚果蕨素 | Biochempartner
已经有0人回复
-
肠道里的"代谢开关"：Fexaramine用肠道限制性重新定义 FXR 激动剂
已经有0人回复
-
DMXAA：从血管破坏剂到STING通路研究的关键工具分子 | Biochempartner
已经有0人回复
-
靶向PD-L1的人源化单克隆抗体阿特珠单抗
已经有0人回复
-
"探针之父"(+)-JQ-1如何改变表观遗传研究 | Biochempartner
已经有0人回复
-
含氟糖皮质激素的外用抗炎利器醋酸氟轻松
已经有0人回复
-
阿莫奈韦（Amenamevir）：解旋酶-引物酶靶向分子的结构特征与合成路径全解析
已经有0人回复
-
利瑞鲁单抗：靶向KIR的NK细胞检查点工具抗体，结构基础与科研应用全解析
已经有0人回复
12楼2013-11-08 08:47:15
charles08
铁杆木虫 (著名写手)
- 应助: 9 (幼儿园)
- 金币: 5813.3
- 散金: 2103
- 红花: 27
- 帖子: 1934
- 在线: 603.9小时
- 虫号: 823046
- 注册: 2009-08-06
- 性别: GG
- 专业: 植物病理学
2楼2013-11-04 23:30:40
machao8405
木虫 (正式写手)
- 应助: 11 (小学生)
- 金币: 6292
- 散金: 31
- 红花: 4
- 帖子: 740
- 在线: 216.3小时
- 虫号: 884679
- 注册: 2009-10-26
- 性别: GG
- 专业: 植物学
3楼2013-11-04 23:33:51
4楼2013-11-05 13:34:12