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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 菌悬液用液体无机盐培养基制备行吗？
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wjg811

木虫 (小有名气)

[求助] 菌悬液用液体无机盐培养基制备行吗？

对于菌悬液的制备，看了下书和一些帖子。归纳下，可分为2种方法。1.斜面培养基上的菌体加入生理盐水或磷酸缓冲液后，用接种环刮菌苔，震荡均匀得到一定浓度菌悬液。2.用LB或牛肉膏蛋白培养基培养到稳定期时，离心收集菌体，再用生理盐水或磷酸缓冲液洗菌体3次后重悬，制得菌悬液。我想问，能不能用无机盐培养基（液体）代替生理盐水或磷酸缓冲液做菌悬液？并且进一步用比浊法在菌密度和OD600之间建立的标准曲线？
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1楼 2013-10-23 15:46:15
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

chenbo1027

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+4, 鼓励热心应助！ 2013-10-23 22:37:24
还要看你的菌悬液制备的目的，一般用于保存的需要尽量降低代谢水平  所以多用无菌水或甘油
如果是用来实验  在不影响实验效果的情况下  也是可以的  至于对实验有没有影响
还应该看整个实验流程涉及的所有环节
例如平板计数的算菌浓的话，无机盐离子会不会使菌体发生移动而影响计数也是不好说的
所以最好还是简单一点的好
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2楼2013-10-23 17:17:48
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普通回帖

wjg811

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by chenbo1027 at 2013-10-23 17:17:48
还要看你的菌悬液制备的目的，一般用于保存的需要尽量降低代谢水平  所以多用无菌水或甘油
如果是用来实验  在不影响实验效果的情况下  也是可以的  至于对实验有没有影响
还应该看整个实验流程涉及的所有环节
例 ...

我是用于做实验的，文献中多用磷酸缓冲液做成菌悬液，接入新的无机盐培养基培养。然后，我想，磷酸缓冲液制备的菌悬液加入新的无机盐培养基肯定改变了无机盐培养基的成分，多少对菌体的培养有些影响，那直接用无机盐培养基制成菌悬液不是更好？
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3楼2013-10-24 00:33:05
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yangjun130

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wjg811: 金币+5 2013-10-31 11:49:48
文献中为什么要那样，肯定是计算好的，不了。你要想清楚为什么要那样

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4楼2013-10-24 06:10:44
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chenbo1027

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
wjg811: 金币+8 2013-10-31 11:50:13
wjg811: 金币+2, ★★★很有帮助 2013-10-31 11:51:42
引用回帖:
3楼: Originally posted by wjg811 at 2013-10-24 00:33:05
我是用于做实验的，文献中多用磷酸缓冲液做成菌悬液，接入新的无机盐培养基培养。然后，我想，磷酸缓冲液制备的菌悬液加入新的无机盐培养基肯定改变了无机盐培养基的成分，多少对菌体的培养有些影响，那直接用无机 ...

按照你说的，我感觉，如果还要洗涤离心那就用缓冲液好了，如果不需要洗涤那就用无机盐也可以
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5楼2013-10-24 09:51:12
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贤愚Libra

银虫 (正式写手)
请问制备菌悬液的磷酸缓冲液是怎么配置的，PH和浓度多大？我找文献没找到，你能把你看的文献传上来吗?谢谢。
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www------sr-------------
6楼2013-10-24 10:02:56
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wangl2037

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wjg811: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-10-31 11:51:02
肯定可以的！前提是你需要消除你无机盐培养基的干扰，特别是有颜色的培养基，你测一下空白培养基的相应OD值就可以。

ps：你可以去看看OD值比浊法测菌体量的原理
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7楼2013-10-24 19:18:01
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wjg811

木虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by chenbo1027 at 2013-10-24 09:51:12
按照你说的，我感觉，如果还要洗涤离心那就用缓冲液好了，如果不需要洗涤那就用无机盐也可以...

它们之间的区别是不是这样的？生理盐水或缓冲液洗涤菌体，可以洗去表面活性剂和其他代谢产物之类的，得到的是纯菌体，而且能保持细胞内外渗透压的平衡，有利于保持菌体活性。无机盐培养基洗涤的话，可以也可以洗去表面活性之类的代谢产物，不过，用无机盐培养基重悬的话（缺少碳源），就等于使细胞处于饥饿状态了？无机盐培养基也能保持细胞内外渗透压平很，细菌还是维持了活性。
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8楼2013-10-31 11:37:15
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wjg811

木虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 贤愚Libra at 2013-10-24 10:02:56
请问制备菌悬液的磷酸缓冲液是怎么配置的，PH和浓度多大？我找文献没找到，你能把你看的文献传上来吗?谢谢。

不好意思，这两天做实验没来及及时回复。缓冲液的配置我在文献中也没有看到具体制备方法的，而且不同细菌培养的话，似乎缓冲液PH值也有不同，通用的就是PH7.2。中文硕博论文有些写了的，百度也有很多不同PH值缓冲液的配方。看你需要多大PH值的缓冲液。硕博论文中你搜搜应该写的较详细，手头现有一篇硕士论文，里面有个配方你自己下载吧。论文名“高效降解长庆石油污染物细菌系的筛选及其特性研究”45页。
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9楼2013-10-31 11:46:09
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wjg811

木虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by wangl2037 at 2013-10-24 19:18:01
肯定可以的！前提是你需要消除你无机盐培养基的干扰，特别是有颜色的培养基，你测一下空白培养基的相应OD值就可以。

ps：你可以去看看OD值比浊法测菌体量的原理

嗯，谢谢！看看原理觉得是可以的。只是没看到有人这么做过，所有求证下高人们。因为自己不是微生物专业出身的，有点点没底气啊，呵呵
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10楼2013-10-31 11:49:30
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