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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 超滤管
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dewdan

新虫 (初入文坛)

[求助] 超滤管

各位虫友们，我第一次用超滤管，50KDa的，是将大肠杆菌菌体细胞破碎后离心取上清超滤，不慎离心不完全膜有点堵住了，然后膜超声清洗了接着用了。。。但是超滤完的东西跑SDS-PAGE胶看了一下膜上的蛋白全都有，50以下的也有，膜下什么蛋白都没有，这不是没起到筛分的效果吗？膜被堵了是不是就不能再用啦？？
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1楼 2013-10-23 10:24:49
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sxxuan

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-10-24 00:21:36
膜被堵了再洗干净，可能会破的，虽然表面我们看不出来。建议换个新管，超滤之前最好用0.22um的滤膜过滤一下，先把其他杂质去掉。
超滤管用之前用无菌水浸泡一下再离心去掉水
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你的日子如何，你的力量也必如何！
2楼2013-10-23 11:42:48
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同东中郎将

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-10-24 00:21:42
dewdan: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-10-25 16:19:10
超滤管起不到筛分的作用。如果能起到分筛作用，纯化不是变得很简单了。
超滤管堵了，可以用0.5M NaOH 清洗一下。
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曾子曰：“士不可以不弘毅，任重而道远。仁以为己任，不亦重乎？死而后已，不亦远乎？”
3楼2013-10-23 12:53:14
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ynkuaile

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-10-24 00:21:47
dewdan: 金币+5, ★★★★★最佳答案 2013-10-29 09:40:20
超滤管没有筛分的功能。截留分子量50KD，并不是说50KD以下的就会流过去。截留分子量50KD，是平均孔径，一般60KD以上的蛋白能被完全截留，但是小分子量的蛋白不一定穿过去，小分子量的蛋白会在孔上架桥，堵孔，使孔径变小甚至完全堵住。举个例子，淘米的篓筛孔很小，但是我拿更细小的沙子装满，沙子不会全部漏出去，刚开始漏一点，后面就不漏下去了。
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4楼2013-10-23 13:26:53
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江正安

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by ynkuaile at 2013-10-23 13:26:53
超滤管没有筛分的功能。截留分子量50KD，并不是说50KD以下的就会流过去。截留分子量50KD，是平均孔径，一般60KD以上的蛋白能被完全截留，但是小分子量的蛋白不一定穿过去，小分子量的蛋白会在孔上架桥，堵孔，使孔径 ...

学习了，不过超滤好像可以除盐和浓缩

[ 发自小木虫客户端 ]
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5楼2013-10-23 23:10:20
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sxxuan

金虫 (著名写手)
★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-10-25 13:37:31
引用回帖:
5楼: Originally posted by 江正安 at 2013-10-23 23:10:20
学习了，不过超滤好像可以除盐和浓缩
...

同意，所以超滤的作用一般只用于快速除盐和浓缩，但如果蛋白浓度太高了，蛋白可能会沉淀，同样会堵住。
一般建议选用1/3孔径大小，例如目的蛋白是100k，就选用30k左右截流量的超滤管，那么就能留住100k的蛋白，否则可能有漏蛋白的情况
哈哈，上述都是从木虫上看到的知识呀
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你的日子如何，你的力量也必如何！
6楼2013-10-25 09:15:35
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dewdan

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 同东中郎将 at 2013-10-23 12:53:14
超滤管起不到筛分的作用。如果能起到分筛作用，纯化不是变得很简单了。
超滤管堵了，可以用0.5M NaOH 清洗一下。

原来如此~长见识了~谢谢~
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7楼2013-10-25 16:18:43
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