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新虫 (初入文坛)

[求助] 超滤管

各位虫友们，我第一次用超滤管，50KDa的，是将大肠杆菌菌体细胞破碎后离心取上清超滤，不慎离心不完全膜有点堵住了，然后膜超声清洗了接着用了。。。但是超滤完的东西跑SDS-PAGE胶看了一下膜上的蛋白全都有，50以下的也有，膜下什么蛋白都没有，这不是没起到筛分的效果吗？膜被堵了是不是就不能再用啦？？

1楼 2013-10-23 10:24:49

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金虫 (著名写手)

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gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-10-24 00:21:36

膜被堵了再洗干净，可能会破的，虽然表面我们看不出来。建议换个新管，超滤之前最好用0.22um的滤膜过滤一下，先把其他杂质去掉。
超滤管用之前用无菌水浸泡一下再离心去掉水

你的日子如何，你的力量也必如何！

2楼2013-10-23 11:42:48

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金虫 (著名写手)

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gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-10-25 13:37:31

引用回帖:

5楼: Originally posted by 江正安 at 2013-10-23 23:10:20
学习了，不过超滤好像可以除盐和浓缩
...

同意，所以超滤的作用一般只用于快速除盐和浓缩，但如果蛋白浓度太高了，蛋白可能会沉淀，同样会堵住。
一般建议选用1/3孔径大小，例如目的蛋白是100k，就选用30k左右截流量的超滤管，那么就能留住100k的蛋白，否则可能有漏蛋白的情况
哈哈，上述都是从木虫上看到的知识呀

你的日子如何，你的力量也必如何！

6楼2013-10-25 09:15:35

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