应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 超滤管
71/1返回列表
查看: 1849  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

dewdan

新虫 (初入文坛)

[求助] 超滤管

各位虫友们，我第一次用超滤管，50KDa的，是将大肠杆菌菌体细胞破碎后离心取上清超滤，不慎离心不完全膜有点堵住了，然后膜超声清洗了接着用了。。。但是超滤完的东西跑SDS-PAGE胶看了一下膜上的蛋白全都有，50以下的也有，膜下什么蛋白都没有，这不是没起到筛分的效果吗？膜被堵了是不是就不能再用啦？？
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

分子生化实验经验积累

» 猜你喜欢
1楼 2013-10-23 10:24:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sxxuan

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-10-24 00:21:36
膜被堵了再洗干净，可能会破的，虽然表面我们看不出来。建议换个新管，超滤之前最好用0.22um的滤膜过滤一下，先把其他杂质去掉。
超滤管用之前用无菌水浸泡一下再离心去掉水
赞一下(2人) 回复此楼
你的日子如何，你的力量也必如何！
2楼2013-10-23 11:42:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

同东中郎将

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-10-24 00:21:42
dewdan: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-10-25 16:19:10
超滤管起不到筛分的作用。如果能起到分筛作用，纯化不是变得很简单了。
超滤管堵了，可以用0.5M NaOH 清洗一下。
赞一下 回复此楼
曾子曰：“士不可以不弘毅，任重而道远。仁以为己任，不亦重乎？死而后已，不亦远乎？”
3楼2013-10-23 12:53:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ynkuaile

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-10-24 00:21:47
dewdan: 金币+5, ★★★★★最佳答案 2013-10-29 09:40:20
超滤管没有筛分的功能。截留分子量50KD，并不是说50KD以下的就会流过去。截留分子量50KD，是平均孔径，一般60KD以上的蛋白能被完全截留，但是小分子量的蛋白不一定穿过去，小分子量的蛋白会在孔上架桥，堵孔，使孔径变小甚至完全堵住。举个例子，淘米的篓筛孔很小，但是我拿更细小的沙子装满，沙子不会全部漏出去，刚开始漏一点，后面就不漏下去了。
赞一下(2人) 回复此楼
4楼2013-10-23 13:26:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

江正安

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by ynkuaile at 2013-10-23 13:26:53
超滤管没有筛分的功能。截留分子量50KD，并不是说50KD以下的就会流过去。截留分子量50KD，是平均孔径，一般60KD以上的蛋白能被完全截留，但是小分子量的蛋白不一定穿过去，小分子量的蛋白会在孔上架桥，堵孔，使孔径 ...

学习了，不过超滤好像可以除盐和浓缩

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
5楼2013-10-23 23:10:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sxxuan

金虫 (著名写手)
★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-10-25 13:37:31
引用回帖:
5楼: Originally posted by 江正安 at 2013-10-23 23:10:20
学习了，不过超滤好像可以除盐和浓缩
...

同意，所以超滤的作用一般只用于快速除盐和浓缩，但如果蛋白浓度太高了，蛋白可能会沉淀，同样会堵住。
一般建议选用1/3孔径大小，例如目的蛋白是100k，就选用30k左右截流量的超滤管，那么就能留住100k的蛋白，否则可能有漏蛋白的情况
哈哈，上述都是从木虫上看到的知识呀
赞一下 回复此楼
你的日子如何，你的力量也必如何！
6楼2013-10-25 09:15:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dewdan

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 同东中郎将 at 2013-10-23 12:53:14
超滤管起不到筛分的作用。如果能起到分筛作用，纯化不是变得很简单了。
超滤管堵了，可以用0.5M NaOH 清洗一下。

原来如此~长见识了~谢谢~
赞一下 回复此楼
7楼2013-10-25 16:18:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 dewdan 的主题更新
71/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 303求调剂 +5 元夕元 2026-03-20 6/300 2026-03-25 09:48 by 雾散后相遇lc
[考研] 考研调剂 +4 呼呼？~+123456 2026-03-24 4/200 2026-03-24 23:16 by barlinike
[考研] 311求调剂 +3 冬十三 2026-03-24 3/150 2026-03-24 21:31 by peike
[考研] 材料专硕找调剂 +5 哈哈哈吼吼吼哈 2026-03-23 5/250 2026-03-24 19:07 by 了了了了。。
[考研] 0854 考研调剂 招生了！AI 方向 +5 pk3725069 2026-03-19 17/850 2026-03-24 17:30 by zhouxuan..
[材料工程] 一志愿C9材料与化工专业总分300求调剂 +4 曼111 2026-03-24 5/250 2026-03-24 15:44 by 星空星月
[考研] 299求调剂 +7 某某某某位 2026-03-21 7/350 2026-03-24 15:24 by cuifj
[考研] 求调剂 +7 十三加油 2026-03-21 7/350 2026-03-23 23:48 by 热情沙漠
[考研] 生物学一志愿985，分数349求调剂 +6 zxts12 2026-03-21 9/450 2026-03-23 18:37 by macy2011
[考研] 一志愿上海交大生物与医药专硕324分，求调剂 +5 jiajunX 2026-03-22 5/250 2026-03-23 18:07 by YMU施老师
[考研] 280分求调剂 一志愿085802 +4 PUMPT 2026-03-22 7/350 2026-03-22 22:13 by 星空星月
[考研] 求调剂一志愿海大，0703化学学硕304分，有大创项目，四级已过 +6 幸运哩哩 2026-03-22 10/500 2026-03-22 20:10 by edmund7
[考研] 324求调剂 +6 lucky呀呀呀鸭 2026-03-20 6/300 2026-03-22 16:01 by ColorlessPI
[考研] 311求调剂 +3 26研0 2026-03-20 3/150 2026-03-22 14:46 by ColorlessPI
[考研] 一志愿华中科技大学071000，求调剂 +4 沿岸有贝壳6 2026-03-21 4/200 2026-03-22 07:21 by ilovexiaobin
[考研] 一志愿深大，0703化学，总分302，求调剂 +4 七月-七七 2026-03-21 4/200 2026-03-21 18:20 by 学员8dgXkO
[考研] 296求调剂 +6 www_q 2026-03-18 10/500 2026-03-20 23:56 by JourneyLucky
[考研] 材料学硕297已过四六级求调剂推荐 +11 adaie 2026-03-19 11/550 2026-03-20 21:30 by laoshidan
[考研] 一志愿西安交通大学 学硕 354求调剂211或者双一流 +3 我想要读研究生 2026-03-20 3/150 2026-03-20 20:13 by JourneyLucky
[考研] 本科郑州大学物理学院，一志愿华科070200学硕，346求调剂 +4 我不是一根葱 2026-03-18 4/200 2026-03-19 09:11 by 浮云166
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭