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dewdan

新虫 (初入文坛)

[求助] 超滤管

各位虫友们,我第一次用超滤管,50KDa的,是将大肠杆菌菌体细胞破碎后离心取上清超滤,不慎离心不完全膜有点堵住了,然后膜超声清洗了接着用了。。。但是超滤完的东西跑SDS-PAGE胶看了一下膜上的蛋白全都有,50以下的也有,膜下什么蛋白都没有,这不是没起到筛分的效果吗?膜被堵了是不是就不能再用啦??
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sxxuan

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2013-10-24 00:21:36
膜被堵了再洗干净,可能会破的,虽然表面我们看不出来。建议换个新管,超滤之前最好用0.22um的滤膜过滤一下,先把其他杂质去掉。
超滤管用之前用无菌水浸泡一下再离心去掉水
你的日子如何,你的力量也必如何!
2楼2013-10-23 11:42:48
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同东中郎将

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2013-10-24 00:21:42
dewdan: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-10-25 16:19:10
超滤管起不到筛分的作用。如果能起到分筛作用,纯化不是变得很简单了。
超滤管堵了,可以用0.5M NaOH 清洗一下。
曾子曰:“士不可以不弘毅,任重而道远。仁以为己任,不亦重乎?死而后已,不亦远乎?”
3楼2013-10-23 12:53:14
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ynkuaile

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2013-10-24 00:21:47
dewdan: 金币+5, ★★★★★最佳答案 2013-10-29 09:40:20
超滤管没有筛分的功能。截留分子量50KD,并不是说50KD以下的就会流过去。截留分子量50KD,是平均孔径,一般60KD以上的蛋白能被完全截留,但是小分子量的蛋白不一定穿过去,小分子量的蛋白会在孔上架桥,堵孔,使孔径变小甚至完全堵住。举个例子,淘米的篓筛孔很小,但是我拿更细小的沙子装满,沙子不会全部漏出去,刚开始漏一点,后面就不漏下去了。
4楼2013-10-23 13:26:53
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江正安

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by ynkuaile at 2013-10-23 13:26:53
超滤管没有筛分的功能。截留分子量50KD,并不是说50KD以下的就会流过去。截留分子量50KD,是平均孔径,一般60KD以上的蛋白能被完全截留,但是小分子量的蛋白不一定穿过去,小分子量的蛋白会在孔上架桥,堵孔,使孔径 ...

学习了,不过超滤好像可以除盐和浓缩

[ 发自小木虫客户端 ]
5楼2013-10-23 23:10:20
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sxxuan

金虫 (著名写手)

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2013-10-25 13:37:31
引用回帖:
5楼: Originally posted by 江正安 at 2013-10-23 23:10:20
学习了,不过超滤好像可以除盐和浓缩
...

同意,所以超滤的作用一般只用于快速除盐和浓缩,但如果蛋白浓度太高了,蛋白可能会沉淀,同样会堵住。
一般建议选用1/3孔径大小,例如目的蛋白是100k,就选用30k左右截流量的超滤管,那么就能留住100k的蛋白,否则可能有漏蛋白的情况
哈哈,上述都是从木虫上看到的知识呀
你的日子如何,你的力量也必如何!
6楼2013-10-25 09:15:35
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dewdan

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 同东中郎将 at 2013-10-23 12:53:14
超滤管起不到筛分的作用。如果能起到分筛作用,纯化不是变得很简单了。
超滤管堵了,可以用0.5M NaOH 清洗一下。

原来如此~长见识了~谢谢~
7楼2013-10-25 16:18:43
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