24小时热门版块排行榜    

查看: 1423  |  回复: 6

遨游生命

铁杆木虫 (正式写手)

[交流] 有没有人验证过这篇文章的数据 已有3人参与

小虫在做实验时,查到了中科大田志刚教授在PNAS上的一篇文章,刚好有小鼠TLR3和TLR4这两个基因的引物,于是直接参考来用。结果这两个基因的引物都不好用,TLR4直接扩增不出来,TLR3明显具有非特性扩增。不知道有没有虫友也参考过这篇文章的引物序列做过这两个基因的扩增?或许是我的实验条件不合适?但是我用的是温度梯度检测,TLR3在几个温度下有明显非特异性扩增,此外的温度范围下没有特异性扩增。请各位虫友赐教,小虫不胜感激啊原文链接地址http://www.pnas.org/content/102/47/17077.full.pdf+html
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

DAX1

新虫 (小有名气)

★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-10-16 09:11:06
楼主,要找到和你一样参考的概率应该极小哦。不知道你是做克隆还是半定量。换个酶试试,话说我这么多年做了大大小小克隆不下50个基因,从来没用过温度梯度检测,一直坚持用kod和phusion这两个酶。实在不行就发信问问他们具体实验操作呗,一般都会给回的。
Ps,八年前上过老田的免疫课,还是很不错的。
2楼2013-10-16 04:20:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

elbo

金虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
直接联系作者,请教一下。
3楼2013-10-16 15:34:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hl16010921

木虫 (正式写手)

★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2013-10-16 19:32:02
1.LZ做PCR之前即使用文献的引物也要先做blast和primer打分,即使是高水平文献引物写错的概率也是很高的。
2.PCR条件的摸索是比较闹心的,耐心的反复做,试试加DMSO,甘油之类的。
3.模板质量如何?PCR条件再好,模板差也不行呀。
4楼2013-10-16 15:58:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

遨游生命

铁杆木虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by hl16010921 at 2013-10-16 15:58:15
1.LZ做PCR之前即使用文献的引物也要先做blast和primer打分,即使是高水平文献引物写错的概率也是很高的。
2.PCR条件的摸索是比较闹心的,耐心的反复做,试试加DMSO,甘油之类的。
3.模板质量如何?PCR条件再好,模 ...

出这两个基因为还有内参基因一个引物。这个内参基因的引物扩增的特异性很好。不知道为什么差别很大
5楼2013-10-16 17:13:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hl16010921

木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
5楼: Originally posted by 遨游生命 at 2013-10-16 17:13:25
出这两个基因为还有内参基因一个引物。这个内参基因的引物扩增的特异性很好。不知道为什么差别很大...

我说的模板问题不仅包括提取的问题,还有基因在特定组织的表达差异,LZ和文献的实验材料来源有无差异?能否找到一定表达的阳性对照?受体的转录不是丰度非常高的,可能和细胞或组织的状态相关。
6楼2013-10-16 20:08:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hl16010921

木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
6楼: Originally posted by hl16010921 at 2013-10-16 20:08:00
我说的模板问题不仅包括提取的问题,还有基因在特定组织的表达差异,LZ和文献的实验材料来源有无差异?能否找到一定表达的阳性对照?受体的转录不是丰度非常高的,可能和细胞或组织的状态相关。...

补充一下,blast和primer5的评分必须做,要是blast结果不好就不要考虑了,几乎一定会有非特异。primer至少80分以上,最好95以上,否则很难优化PCR条件。
7楼2013-10-16 20:15:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 遨游生命 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +37 医学老男孩 2026-08-13 86/4300 2026-08-18 00:18 by longsantaizi
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +6 angus9576 2026-08-17 11/550 2026-08-17 23:57 by angus9576
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +8 wangze12014 2026-08-14 10/500 2026-08-17 17:05 by xter9665
[基金申请] 时间戳变了,能看出什么问题? +4 基诺咪客 2026-08-17 4/200 2026-08-17 16:10 by Vivilian
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜? +12 Ldrop2023 2026-08-13 15/750 2026-08-17 15:02 by 小豌豆_发芽
[基金申请] 今天系统多次维护,明天很可能放榜! +8 zju2000 2026-08-16 9/450 2026-08-17 12:20 by lmz0216
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +13 archvillain 2026-08-15 25/1250 2026-08-16 20:13 by zhaosm1982
[基金申请] 2027广东省杰青 +3 奶牛小黑 2026-08-15 6/300 2026-08-16 20:07 by 奶牛小黑
[基金申请] 快农历七夕节了,轻松一下,男人悄悄话,女施主请不要进来。 +3 Tide man 2026-08-14 3/150 2026-08-16 17:47 by jurkat.1640
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +7 启萌科技 2026-08-12 26/1300 2026-08-16 12:35 by 启萌科技
[基金申请] 有时候,自然基金真的不能太认真 (我的申报经验) +10 majunge000 2026-08-11 12/600 2026-08-16 08:18 by xli1984
[精细化工] 招聘 金属平磨液,抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
[基金申请] 各位道友,我要去昆明玩几天,回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果? +4 yuleib84 2026-08-11 4/200 2026-08-14 23:05 by lfy8008
[硕博家园] 读博的好处 +4 lnee 2026-08-11 4/200 2026-08-14 10:20 by ahsoarli
[基金申请] 重要来源:本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] Filecode 又变了,巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 分享一下我之前已中青C的计划书的filecode +4 布布和一二 2026-08-11 5/250 2026-08-13 12:56 by cratir
[基金申请] 结合人工智能,周易传统文化,filecode打分制来了,3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 什么时候出结果,有咨询渠道??? +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
信息提示
请填处理意见