应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 有没有人验证过这篇文章的数据
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
71/1返回列表
查看: 1197  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

遨游生命

铁杆木虫 (正式写手)

[交流] 有没有人验证过这篇文章的数据 已有3人参与

小虫在做实验时，查到了中科大田志刚教授在PNAS上的一篇文章，刚好有小鼠TLR3和TLR4这两个基因的引物，于是直接参考来用。结果这两个基因的引物都不好用，TLR4直接扩增不出来，TLR3明显具有非特性扩增。不知道有没有虫友也参考过这篇文章的引物序列做过这两个基因的扩增？或许是我的实验条件不合适？但是我用的是温度梯度检测，TLR3在几个温度下有明显非特异性扩增，此外的温度范围下没有特异性扩增。请各位虫友赐教，小虫不胜感激啊原文链接地址http://www.pnas.org/content/102/47/17077.full.pdf+html
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-10-15 09:15:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

DAX1

新虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-10-16 09:11:06
楼主，要找到和你一样参考的概率应该极小哦。不知道你是做克隆还是半定量。换个酶试试，话说我这么多年做了大大小小克隆不下50个基因，从来没用过温度梯度检测，一直坚持用kod和phusion这两个酶。实在不行就发信问问他们具体实验操作呗，一般都会给回的。
Ps，八年前上过老田的免疫课，还是很不错的。
赞一下 回复此楼
2楼2013-10-16 04:20:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

elbo

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
直接联系作者，请教一下。
赞一下 回复此楼
3楼2013-10-16 15:34:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hl16010921

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-10-16 19:32:02
1.LZ做PCR之前即使用文献的引物也要先做blast和primer打分，即使是高水平文献引物写错的概率也是很高的。
2.PCR条件的摸索是比较闹心的，耐心的反复做，试试加DMSO，甘油之类的。
3.模板质量如何？PCR条件再好，模板差也不行呀。
赞一下 回复此楼
4楼2013-10-16 15:58:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

遨游生命

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by hl16010921 at 2013-10-16 15:58:15
1.LZ做PCR之前即使用文献的引物也要先做blast和primer打分，即使是高水平文献引物写错的概率也是很高的。
2.PCR条件的摸索是比较闹心的，耐心的反复做，试试加DMSO，甘油之类的。
3.模板质量如何？PCR条件再好，模 ...

出这两个基因为还有内参基因一个引物。这个内参基因的引物扩增的特异性很好。不知道为什么差别很大
赞一下 回复此楼
5楼2013-10-16 17:13:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hl16010921

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
5楼: Originally posted by 遨游生命 at 2013-10-16 17:13:25
出这两个基因为还有内参基因一个引物。这个内参基因的引物扩增的特异性很好。不知道为什么差别很大...

我说的模板问题不仅包括提取的问题，还有基因在特定组织的表达差异，LZ和文献的实验材料来源有无差异？能否找到一定表达的阳性对照？受体的转录不是丰度非常高的，可能和细胞或组织的状态相关。
赞一下 回复此楼
6楼2013-10-16 20:08:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hl16010921

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
6楼: Originally posted by hl16010921 at 2013-10-16 20:08:00
我说的模板问题不仅包括提取的问题，还有基因在特定组织的表达差异，LZ和文献的实验材料来源有无差异？能否找到一定表达的阳性对照？受体的转录不是丰度非常高的，可能和细胞或组织的状态相关。...

补充一下，blast和primer5的评分必须做，要是blast结果不好就不要考虑了，几乎一定会有非特异。primer至少80分以上，最好95以上，否则很难优化PCR条件。
赞一下 回复此楼
7楼2013-10-16 20:15:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 遨游生命 的主题更新
71/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿中海洋320化学工程与技术学硕求调剂 +4 披星河 2026-03-30 4/200 2026-03-31 04:15 by fmesaito
[考研] 311求调剂一志愿合肥工业大学 +4 秋二十二 2026-03-30 4/200 2026-03-31 04:11 by fmesaito
[考研] 福建理工大学材料学院先进合金团队招收考研调剂学生 +3 大华金商都 2026-03-30 4/200 2026-03-31 01:04 by 方英俊602
[考研] 求调剂，一志愿 南京航空航天大学 ，080500材料科学与工程学硕，总分289分 +9 @taotao 2026-03-29 9/450 2026-03-30 22:29 by 我是小康
[考研] 085602化工求调剂（331分） +8 111@127 2026-03-30 8/400 2026-03-30 21:23 by 研究僧导导
[考研] 一志愿哈尔滨工业大学材料与化工方向336分 +12 辰沐5211314 2026-03-26 12/600 2026-03-30 19:28 by Wang200018
[考研] 0703一志愿9，初试成绩：338，四六级已过，有科研经历，求调剂！ +7 Zuhui0306 2026-03-25 7/350 2026-03-30 19:01 by 源_2020
[考研] 0703化学求调剂 +6 丹青奶盖 2026-03-26 8/400 2026-03-30 18:33 by 探123
[考研] 298求调剂 +3 什么是胖头鱼 2026-03-30 5/250 2026-03-30 14:41 by 青海小西牛
[基金申请] 面上5B能上会吗？ +7 redcom 2026-03-29 7/350 2026-03-30 12:44 by 爱搞研究的小孩
[考研] 283求调剂（080500） +14 A child 2026-03-27 14/700 2026-03-30 12:06 by 探123
[考研] 348求调剂 +6 小懒虫不懒了 2026-03-28 6/300 2026-03-30 10:29 by Evan_Liu
[考研] 【求调剂】085601材料工程专硕 | 总分272 | +7 脚滑的守法公民 2026-03-27 7/350 2026-03-29 20:21 by dophin1985
[考研] 考研调剂 +7 小蜡新笔 2026-03-29 7/350 2026-03-29 19:00 by 学员8dgXkO
[考研] 315分求调剂 +7 26考研上岸版26 2026-03-26 7/350 2026-03-28 04:05 by fmesaito
[考研] 265求调剂 +8 小木虫085600 2026-03-27 8/400 2026-03-27 22:16 by 无际的草原
[考研] 一志愿211院校 344分 东北农业大学生物学学硕，求调剂 +5 丶风雪夜归人丶 2026-03-26 8/400 2026-03-27 19:22 by 丶风雪夜归人丶
[考研] 求调剂 +4 零八# 2026-03-27 4/200 2026-03-27 18:07 by yu221
[考研] 315调剂 +4 0860求调剂 2026-03-26 5/250 2026-03-27 11:23 by wangjy2002
[考研] 一志愿天津大学339材料与化工求调剂 +3 江往卖鱼 2026-03-26 3/150 2026-03-26 09:42 by 王小欠i
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭