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遨游生命

铁杆木虫 (正式写手)

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专业: 免疫生物学

[交流] 有没有人验证过这篇文章的数据已有3人参与

小虫在做实验时，查到了中科大田志刚教授在PNAS上的一篇文章，刚好有小鼠TLR3和TLR4这两个基因的引物，于是直接参考来用。结果这两个基因的引物都不好用，TLR4直接扩增不出来，TLR3明显具有非特性扩增。不知道有没有虫友也参考过这篇文章的引物序列做过这两个基因的扩增？或许是我的实验条件不合适？但是我用的是温度梯度检测，TLR3在几个温度下有明显非特异性扩增，此外的温度范围下没有特异性扩增。请各位虫友赐教，小虫不胜感激啊原文链接地址http://www.pnas.org/content/102/47/17077.full.pdf+html

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1楼 2013-10-15 09:15:16

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引用回帖:

4楼: Originally posted by hl16010921 at 2013-10-16 15:58:15
1.LZ做PCR之前即使用文献的引物也要先做blast和primer打分，即使是高水平文献引物写错的概率也是很高的。
2.PCR条件的摸索是比较闹心的，耐心的反复做，试试加DMSO，甘油之类的。
3.模板质量如何？PCR条件再好，模 ...

出这两个基因为还有内参基因一个引物。这个内参基因的引物扩增的特异性很好。不知道为什么差别很大