应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 材料区 » 生物材料 » 材料表征测试 » 血小板黏附实验 拍电镜未得到想要的结果 一些问题
251/3返回列表123下一页
查看: 3804  |  回复: 24
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

wwsswww

金虫 (初入文坛)

[求助] 血小板黏附实验 拍电镜未得到想要的结果 一些问题

最近在做血小板黏附实验，拍了几次SEM感觉制样失败，请大家帮忙看看是哪里出了问题，热烈欢迎多多讨论。
材料是薄膜形态。
------------------------------------------------------
富血小板血浆（PRP)制备：采用的是兔血，耳缘取血后，以 9:1 与 109 mol/L 柠檬酸三钠溶液混合，1200rpm 离心15min，取上层清液。
黏附过程：37℃，将材料浸泡1h；PBS轻轻洗涤；用2.5%戊二醛-PBS溶液在4℃下固定24h;乙醇-水溶液(30,50,70,80,90,95,100%)梯度脱水,每个梯度30min;喷金测SEM.
-------------------------------------------------------
拍得电镜图如下

血小板黏附实验 拍电镜未得到想要的结果 一些问题
血小板黏附实验 拍电镜未得到想要的结果 一些问题-1
文献中的如下

血小板黏附实验 拍电镜未得到想要的结果 一些问题-2

和文献对比发现完全不像，拍出来椭圆状的不像血小板有伪足伸出。
-------------------------------------------------------
疑问：1.PRP的制备中是不是有问题，而导致没有收集到富含血小板的血浆;
          2.有些文献中梯度脱水溶液是用乙醇和PBS配制的，但是乙醇含量50%以后就会出现浑浊，应该是盐在乙醇中的溶解度下降导致的，所以不清楚这个乙醇-PBS到底是怎么配制的；
          3.电镜图上有些点，没有具体形貌，会不会是操作过程中混入的脏东西;
          4.最后的干燥，如果不用冻干机，置于干燥器中自然晾干是否可行呢.
   
各位前辈大牛，求解答。。。

[ Last edited by wwsswww on 2013-10-11 at 10:23 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-10-11 10:20:18
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lynne619

木虫 (著名写手)
感觉在里面看到了红细胞~~
赞一下 回复此楼
2楼2013-10-11 10:25:44
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lynne619

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wwsswww: 金币+5 2013-10-18 08:52:52
另外你脱水之后，没有脱醇哦~乙酸异戊脂 脱醇
赞一下 回复此楼
3楼2013-10-11 10:28:18
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wwsswww

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by lynne619 at 2013-10-11 10:25:44
感觉在里面看到了红细胞~~

我也觉得椭圆的东西像是红细胞- -！
应该是是PRP没有制备好导致的？
赞一下 回复此楼
4楼2013-10-11 10:28:21
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wwsswww

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by lynne619 at 2013-10-11 10:28:18
另外你脱水之后，没有脱醇哦~乙酸异戊脂 脱醇

嗯，是的，没有再用乙酸异戊酯。
我是这样想的，即使没有脱醇，那也至少应该有一些血小板出现（就算形貌不好看），可现在看问题貌似不出在这一步？
赞一下 回复此楼
5楼2013-10-11 10:31:44
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lynne619

木虫 (著名写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by wwsswww at 2013-10-11 10:28:21
我也觉得椭圆的东西像是红细胞- -！
应该是是PRP没有制备好导致的？...

我是上学的时候做过这个实验，具体记不清了。这个帖子http://muchong.com/html/200908/1487363.html上面说富含血小板血浆上层液（PRP）再以3000r／min离心10min，制备得到血小板血浆（PPP）。你可以点击链接看看~
赞一下 回复此楼
6楼2013-10-11 10:39:19
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lynne619

木虫 (著名写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by wwsswww at 2013-10-11 10:31:44
嗯，是的，没有再用乙酸异戊酯。
我是这样想的，即使没有脱醇，那也至少应该有一些血小板出现（就算形貌不好看），可现在看问题貌似不出在这一步？...

是滴，问题不在这一步，不过既然传统过程是这样滴，不要偷工减料好不好呀~~汗~
赞一下 回复此楼
7楼2013-10-11 10:40:30
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wwsswww

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by lynne619 at 2013-10-11 10:40:30
是滴，问题不在这一步，不过既然传统过程是这样滴，不要偷工减料好不好呀~~汗~...

主要是好多相关文献中也不提到后面的脱醇，所以~~

看了给的链接，请问,你当时离心是要离两次再混合吗？论坛里相关帖子都看了一遍，基本是离心一次取上层的。
赞一下 回复此楼
8楼2013-10-11 10:50:18
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lynne619

木虫 (著名写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by wwsswww at 2013-10-11 10:50:18
主要是好多相关文献中也不提到后面的脱醇，所以~~

看了给的链接，请问,你当时离心是要离两次再混合吗？论坛里相关帖子都看了一遍，基本是离心一次取上层的。...

...具体确实记不清了~~这已经是五年前滴事情鸟~
赞一下 回复此楼
9楼2013-10-11 10:53:11
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wwsswww

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by lynne619 at 2013-10-11 10:53:11
...具体确实记不清了~~这已经是五年前滴事情鸟~...

还是非常感谢
回复此楼
10楼2013-10-11 10:55:00
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 wwsswww 的主题更新
251/3返回列表123下一页
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 9zw1gfyi7x 2026-07-31 12/600 2026-08-01 20:33 by Kddn1pB6pAzX
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 9zw1gfyi7x 2026-07-31 12/600 2026-08-01 20:31 by Kddn1pB6pAzX
[教师之家] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 9zw1gfyi7x 2026-07-31 10/500 2026-08-01 20:23 by Kddn1pB6pAzX
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 9zw1gfyi7x 2026-07-31 9/450 2026-08-01 20:13 by Kddn1pB6pAzX
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 jzg3xk1po8 2026-07-31 11/550 2026-08-01 20:03 by Kddn1pB6pAzX
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 jzg3xk1po8 2026-07-31 10/500 2026-08-01 19:57 by Kddn1pB6pAzX
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 jzg3xk1po8 2026-07-31 13/650 2026-08-01 19:57 by Kddn1pB6pAzX
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 jzg3xk1po8 2026-07-31 10/500 2026-08-01 19:53 by Kddn1pB6pAzX
[基金申请] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 9zw1gfyi7x 2026-08-01 3/150 2026-08-01 19:00 by Kddn1pB6pAzX
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 9zw1gfyi7x 2026-08-01 3/150 2026-08-01 18:51 by Kddn1pB6pAzX
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 9zw1gfyi7x 2026-08-01 9/450 2026-08-01 18:43 by Kddn1pB6pAzX
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 9zw1gfyi7x 2026-08-01 7/350 2026-08-01 18:43 by Kddn1pB6pAzX
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 9zw1gfyi7x 2026-07-31 8/400 2026-08-01 18:22 by Kddn1pB6pAzX
[基金申请] 微信指数没变化，科研之友没阅读 +14 wangze12014 2026-07-28 18/900 2026-07-31 18:35 by lzchaihuo
[基金申请] 系统今天又提示维护了，估计离放榜不远了 +11 winnerche 2026-07-29 15/750 2026-07-30 23:08 by jnhyjjm
[基金申请] 你们的时间戳变了吗 +3 archvillain 2026-07-30 4/200 2026-07-30 18:53 by levinzhwen
[有机交流] 产物和副产物价值比较 30+4 小汤02 2026-07-27 5/250 2026-07-30 12:44 by czyzsu
[基金申请] 时间戳他又来了 +14 晓晓爱翠翠 2026-07-26 17/850 2026-07-29 16:30 by 呵呵二哥
[基金申请] 同事接到电话了，我却没有 +4 1234567wang 2026-07-27 4/200 2026-07-28 10:11 by GOODLUCKER
[分析] 水蒸气蒸馏法乳化现象 +3 月光娇娇 2026-07-26 3/150 2026-07-26 23:25 by caiyun
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭