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wwsswww

金虫 (初入文坛)

[求助] 血小板黏附实验 拍电镜未得到想要的结果 一些问题

最近在做血小板黏附实验,拍了几次SEM感觉制样失败,请大家帮忙看看是哪里出了问题,热烈欢迎多多讨论。
材料是薄膜形态。
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富血小板血浆(PRP)制备:采用的是兔血,耳缘取血后,以 9:1 与 109 mol/L 柠檬酸三钠溶液混合,1200rpm 离心15min,取上层清液。
黏附过程:37℃,将材料浸泡1h;PBS轻轻洗涤;用2.5%戊二醛-PBS溶液在4℃下固定24h;乙醇-水溶液(30,50,70,80,90,95,100%)梯度脱水,每个梯度30min;喷金测SEM.
-------------------------------------------------------
拍得电镜图如下

血小板黏附实验 拍电镜未得到想要的结果 一些问题
血小板黏附实验 拍电镜未得到想要的结果 一些问题-1
文献中的如下

血小板黏附实验 拍电镜未得到想要的结果 一些问题-2

和文献对比发现完全不像,拍出来椭圆状的不像血小板有伪足伸出。
-------------------------------------------------------
疑问:1.PRP的制备中是不是有问题,而导致没有收集到富含血小板的血浆;
          2.有些文献中梯度脱水溶液是用乙醇和PBS配制的,但是乙醇含量50%以后就会出现浑浊,应该是盐在乙醇中的溶解度下降导致的,所以不清楚这个乙醇-PBS到底是怎么配制的;
          3.电镜图上有些点,没有具体形貌,会不会是操作过程中混入的脏东西;
          4.最后的干燥,如果不用冻干机,置于干燥器中自然晾干是否可行呢.
   
各位前辈大牛,求解答。。。

[ Last edited by wwsswww on 2013-10-11 at 10:23 ]
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lynne619

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
wwsswww: 金币+5 2013-10-18 08:52:52
另外你脱水之后,没有脱醇哦~乙酸异戊脂 脱醇
3楼2013-10-11 10:28:18
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lynne619

木虫 (著名写手)

感觉在里面看到了红细胞~~
2楼2013-10-11 10:25:44
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wwsswww

金虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by lynne619 at 2013-10-11 10:25:44
感觉在里面看到了红细胞~~

我也觉得椭圆的东西像是红细胞- -!
应该是是PRP没有制备好导致的?
4楼2013-10-11 10:28:21
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wwsswww

金虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by lynne619 at 2013-10-11 10:28:18
另外你脱水之后,没有脱醇哦~乙酸异戊脂 脱醇

嗯,是的,没有再用乙酸异戊酯。
我是这样想的,即使没有脱醇,那也至少应该有一些血小板出现(就算形貌不好看),可现在看问题貌似不出在这一步?
5楼2013-10-11 10:31:44
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