24小时热门版块排行榜

返回列表

当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

yini4632

铁虫 (初入文坛)

应助: 2 (幼儿园)
金币: 136
帖子: 20
在线: 25.5小时
虫号: 1514280
注册: 2011-11-28
专业: 植物病理学

[求助] PEG介导原生质体遗传转化的问题，求高手解答！！

实验室以前用于农杆菌介导遗传转化的双元载体，用于构建突变体库的，含有GFP+潮霉素基因，我想用来检测下自己建立的PEG介导的原生质体转化体系，不知道到可以不？对于原生质体介导的遗传转化总是弄不清楚，质粒进入原生质体后，是不是整个质粒随机插入到基因组中。农杆菌中有vir基因，可以切除T-DNA然后随机插入，原生质体中质粒整合到基因组中是怎么整合上去的，跟农杆菌介导区别在哪里？迷糊中。。。。。还有用于农杆菌介导的基因敲除质粒，含有同源臂的质粒，农杆菌介导后有同源重组和随机插入2种转化子，那这种质粒用原生质体介导是不是也会出现同源重组和随机插入的转化子？

[ Last edited by yini4632 on 2013-10-8 at 20:03 ]

回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

1楼 2013-10-08 19:16:37

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

咆哮的白菜

金虫 (正式写手)

应助: 12 (小学生)
金币: 4800.7
散金: 680
帖子: 602
在线: 122.5小时
虫号: 1074287
注册: 2010-08-13
性别: GG
专业: 植物病理学

引用回帖:

6楼: Originally posted by yini4632 at 2013-10-15 10:39:46
因为看一些农杆菌介导的原理，好像是农杆菌本身除了能侵染细胞，释放质粒进入，还有自身特殊的vir基因，可以切除质粒上的TNDA，然后插入到基因组中。这个vir基因好像是农杆菌自身特有的，导入的质粒上没有，如果直 ...

对于随机插入的原理我确实不清楚，但是在做基因敲除的时候，转入细胞内的DNA片段除了同源交换还是有机会整合到基因组中的。至于整个质粒在细胞内的整合应该是没有问题的，好像有些原核表达和真核表达的原理也是质粒上的片段整合到基因组上再表达的，但原理我也不是很清楚，你可以查一下分子克隆那本大厚书。