应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PEG介导原生质体遗传转化的问题，求高手解答！！
51/1返回列表
查看: 6213  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

yini4632

铁虫 (初入文坛)

[求助] PEG介导原生质体遗传转化的问题，求高手解答！！

实验室以前用于农杆菌介导遗传转化的双元载体，用于构建突变体库的，含有GFP+潮霉素基因，我想用来检测下自己建立的PEG介导的原生质体转化体系，不知道到可以不？对于原生质体介导的遗传转化总是弄不清楚，质粒进入原生质体后，是不是整个质粒随机插入到基因组中。农杆菌中有vir基因，可以切除T-DNA然后随机插入，原生质体中质粒整合到基因组中是怎么整合上去的，跟农杆菌介导区别在哪里？迷糊中。。。。。还有用于农杆菌介导的基因敲除质粒，含有同源臂的质粒，农杆菌介导后有同源重组和随机插入2种转化子，那这种质粒用原生质体介导是不是也会出现同源重组和随机插入的转化子？

[ Last edited by yini4632 on 2013-10-8 at 20:03 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-10-08 19:16:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

547star

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-10-11 00:03:47
印象是农杆菌在乙酰丁香酮诱导下，侵染，通过Ti/Ci上的一个蛋白与原生质体细胞形成通道，把T-DNA区DNA通过通道转入原生质体细胞，DNA转进去后，有的就发生整合，在选择压力下，可以筛选出来，再进一步鉴定确认确实发生整合了。
赞一下 回复此楼
为什么
4楼2013-10-09 22:23:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答

yini4632

铁虫 (初入文坛)
求帮助~~~~~~~~~~~~~
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2013-10-09 15:00:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zgb1982

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
这个不是很懂啊。不过我觉得脓杆菌主要是利用其侵染性使质粒进入细胞内吧。感觉和直接转化原生质体是一样原理。
赞一下 回复此楼
3楼2013-10-09 21:18:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

咆哮的白菜

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-10-11 00:03:53
农杆菌介导是通过农杆菌的侵染作用将质粒转到目的细胞内，PEG介导是通过氯化钙和PEG对DNA的附着沉积和对细胞质膜的破坏作用，通过热击电击或其他刺激作用使DNA片段进入到原生质体内。不知道你是要验证你的转化方法是否正确还是转化后的问题。转化完成以后，在细胞内的作用机制应该是一样的，至于会不会出现两种结果，我认为是肯定的，肯定会有随机插入的和同源交换的。
　　个人意见，欢迎讨论。
赞一下(1人) 回复此楼
姥姥不疼，舅舅不爱
5楼2013-10-10 23:33:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭